目的:建立高危型人乳頭瘤病毒(HPV)E6/E7質(zhì)控品,用于評價高危型HPV E6/E7 mRNA檢測試劑盒的性能。方法:根據(jù)高危型HPV 16和HPV 18的E6/E7基因序列設(shè)計引物,從感染HPV 16和HPV 18宮頸上皮細胞中提取DNA作為模板,通過PCR擴增獲得帶有目的基因的產(chǎn)物。采用限制性內(nèi)切酶對帶有目的基因的PCR產(chǎn)物和表達載體分別進行酶切,將目的基因與表達載體連接,然后轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞,篩選出陽性菌落進行測序。然后將陽性菌液進行超聲誘導(dǎo),制備假病毒溶液。采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法對假病毒溶液提取的RNA進行鑒定。結(jié)果:通過序列測定和熒光定量RT-PCR法檢測,結(jié)果表明成功建立了高危型HPV E6/E7假病毒質(zhì)控品。結(jié)論:本研究建立了HPV E6/E7質(zhì)控品的方法,可為高危型HPV E6/E7 mRNA檢測試劑的質(zhì)量控制提供質(zhì)控品。

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【文章目錄】：
1 材料
2 方法
3 結(jié)果
4 討論



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