研究背景:在缺血性實體瘤內(nèi),葡萄糖的獲取和利用經(jīng)常受到限制。盡管腫瘤細胞長期處于這種應(yīng)激條件下,但其仍可以通過啟動未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPR)來維持細胞內(nèi)動態(tài)平衡,從而促進細胞的存活。目的:針對糖剝奪條件下乳腺癌細胞內(nèi)發(fā)生的UPR活化現(xiàn)象,我們擬篩選抑制UPR的新型喹啉酮類衍生物,并研究其抗乳腺癌細胞增殖作用機制。方法:建立糖剝奪或2-脫氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)誘導(dǎo)的應(yīng)激環(huán)境,研究喹啉酮類衍生物(2-hexyl-3-methyl-4(1H)-quinolinone,HHQ-4)抑制乳腺癌細胞(MCF-7和MDA-MB-231)的增殖作用。通過基因轉(zhuǎn)染、基因活性剪切形式分析,蛋白磷酸化及表達水平檢測等方法,進一步研究在糖剝奪條件下,HHQ-4對乳腺癌細胞內(nèi)發(fā)生UPR反應(yīng)關(guān)鍵調(diào)控蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)通路的影響,并進一步研究該調(diào)控作用與HHQ-4體外抗乳腺癌細胞增殖作用的相關(guān)性。結(jié)果:在糖剝奪應(yīng)激條件下,HHQ-4對乳腺癌...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1 引言
    1.1 乳腺癌發(fā)展及治療現(xiàn)狀
    1.2 腫瘤異質(zhì)性
    1.3 糖剝奪誘導(dǎo)腫瘤細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    1.4 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白GRP78 與腫瘤耐受
2 HHQ-4 在糖剝奪條件下對乳腺癌細胞增殖作用的影響
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗細胞株
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 一抗來源
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 主要試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 細胞活力檢測
        2.3.3 EDU摻入實驗
        2.3.4 克隆形成實驗
        2.3.5 細胞增殖代數(shù)分布分析
        2.3.6 凋亡檢測
        2.3.7 免疫印跡檢測
        2.3.8 熒光素酶報告基因分析
        2.3.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 HHQ-4 對乳腺癌細胞活力的影響
        2.4.2 HHQ-4 對應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細胞增殖作用的影響
        2.4.3 HHQ-4 對乳腺癌細胞克隆形成能力和細胞增殖代數(shù)分布的影響
        2.4.4 HHQ-4 對應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細胞凋亡的影響
    2.5 討論
3 HHQ-4在糖剝奪條件下抑制乳腺癌細胞增殖作用的分子機制研究
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗細胞株
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 一抗來源
        3.2.4 主要儀器
        3.2.5 主要試劑配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2克隆形成實驗
        3.3.3 胞漿和胞核蛋白提取
        3.3.4 免疫印跡檢測
        3.3.5 XBP-1活性形式剪切分析
        3.3.6 RNA逆轉(zhuǎn)錄和實時熒光定量PCR(RT-PCR)分析
        3.3.7 表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 HHQ-4 對應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細胞葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白影響的時效關(guān)系
        3.4.2 HHQ-4 對應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細胞葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白影響的量效關(guān)系
        3.4.3 HHQ-4 抑制乳腺癌細胞增殖依賴于GRP78 蛋白表達的下調(diào)
        3.4.4 無糖應(yīng)激環(huán)境對PERK/eIF2α/ATF4 通路的影響
        3.4.5 HHQ-4 對無糖誘導(dǎo)的PERK/eIF2α/ATF4 通路相關(guān)蛋白表達的影響
        3.4.6 HHQ-4 抑制GRP78 表達和細胞增殖是部分通過阻斷PERK/eIF2α/ATF4 信號通路來實現(xiàn)
        3.4.7 HHQ-4 對無糖應(yīng)激誘導(dǎo)的ATF6 蛋白表達的影響
        3.4.8 HHQ-4 抑制GRP78 表達和細胞增殖是部分通過阻斷ATF6 信號通路
        3.4.9 無糖應(yīng)激環(huán)境對IRE1/XBP1 通路的影響
        3.4.10 HHQ-4 對無糖應(yīng)激誘導(dǎo)的IRE1/XBP1 信號通路的影響
        3.4.11 HHQ-4 抑制GRP78 表達和細胞增殖是部分通過阻斷IRE1/XBP1 信號通路來實現(xiàn)
    3.5 討論
4 全文總結(jié)
致謝
參考文獻
附圖1
附圖2
附圖3
個人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果



本文編號：3765895