本文關鍵詞：左氧氟沙星對大鼠纖維環(huán)細胞的毒性作用的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討喹諾酮類藥物對纖維環(huán)細胞的作用。方法:這項研究的目的是以離體實驗探討左氧氟沙星對大鼠纖維環(huán)細胞的影響。酶消化法來原代培養(yǎng)大鼠的纖維環(huán)細胞,貼壁的細胞融合為單層時,用含有EDTA的0.2%的胰蛋白酶消化后傳代培養(yǎng).當細胞傳至第3代時,以不含胎牛血清以及酚紅的DMEM/F12培養(yǎng)液來培養(yǎng)細胞,按照以下濃度來分組實驗,每組為5到6個樣本。對照組:以不含左氧氟沙星的培養(yǎng)液處理;30μg/ml組:加入濃度為30μg/ml的左氧氟沙星干預;60μg/ml組:加入濃度為60μg/ml的左氧氟沙星干預,90μg/ml組:加入濃度為90μg/ml的左氧氟沙星干預,細胞培養(yǎng)24小時后,應用:(1)應用倒置相差顯微鏡來觀察大鼠的纖維環(huán)細胞形態(tài);(2)用實時定量PCR的法來檢測纖維環(huán)細胞中的caspase-3蛋白和MMP-3蛋白相關基因表達情況;(3)western印跡法對caspase-3蛋白與MMP-3蛋白定量檢測;(4)應用流式細胞學技術來進行大鼠纖維環(huán)細胞最終凋亡率的檢測。(5)運用MTS方法測定細胞增殖活力,(6)caspase-3活性檢測試劑盒檢測caspase-3的活性。大鼠的纖維環(huán)細胞分別以濃度為(0,30,60,and 90μg/ml)的左氧氟沙星處理,隨即研究左氧氟沙星對其可能的細胞毒性作用。結果:(1)原代大鼠的纖維環(huán)細胞多呈現(xiàn)出多角形與長梭形,且輪廓明顯,細胞核呈現(xiàn)出圓形以及橢圓形,細胞質內可見有分泌顆粒,24~48 h后細胞可貼壁生長,7~8 d細胞即進入其對數(shù)生長期,可傳6~8代。經(jīng)左氧氟沙星作用過的細胞可觀察出細胞皺縮、空泡形成等凋亡征象。(2)以流式細胞學技術觀察大鼠纖維環(huán)細胞在不同濃度的左氧氟沙星處理下的細胞形態(tài)結果顯示,左氧氟沙星在濃度為0μg/ml時大鼠纖維環(huán)細胞的凋亡率為2.70%?0.32%左氧氟沙星在濃度為30μg/ml時大鼠纖維環(huán)細胞的凋亡率為6.41%?0.33%,左氧氟沙星在濃度為60μg/ml時大鼠纖維環(huán)細胞的凋亡率為9.35%?0.64%,左氧氟沙星在濃度為90μg/ml時大鼠纖維環(huán)細胞的凋亡率為12.83%?0.67%,差異具有統(tǒng)計學意義。即左氧氟沙星是以濃度依賴的方式引起了大鼠纖維環(huán)細胞的凋亡率逐漸升高。(3)用caspase-3活性檢測試劑盒(碧云天)來檢測細胞中caspase-3的活性,結果顯示在濃度依次為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml左氧氟沙星的條件下,細胞caspase-3的活性與對照組相比較分別提高到3.1倍、3.9倍、4.5倍、6.4倍。差異具有統(tǒng)計學意義。(4)通過MTS方法檢測細胞活力,結果顯示左氧氟沙星濃度為10、20、40、80μg/ml時,細胞的活力分別降低到95.8%,91.5%,88.2%,and 83.2%。差異具有統(tǒng)計學意義。(5)用Western blot技術來檢測大鼠纖維環(huán)細胞中的caspase-3蛋白在不同濃度的左氧氟沙星處理下的表達。其結果顯示:當對照組、左氧氟沙星濃度依次為30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml時的灰度值(/β-actin)分別為:0.19?0.03、0.28?0.02、0.39?0.02、0.49?0.03。Western blot技術檢測大鼠纖維環(huán)細胞中的MMP-3蛋白在不同濃度左氧氟沙星處理下的表達情況為表達如下,當對照組、左氧氟沙星組的濃度依次為30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml時的灰度值(/β-actin)依次為:0.21?0.05、0.45?0.06、0.61?0.03、0.81?0.03。其組間差異具有統(tǒng)計學意義。(6)實時定量PCR檢測caspase-3蛋白的基因表達情況,結果顯示,對照組、左氧氟沙星濃度30、60、90μg/ml的相對ct值(/β-actin)分別為:0.19?0.03、0.31?0.06、0.65?0.04、0.78?0.06。實時定量PCR檢測MMP-3蛋白的基因表達情況,結果顯示,對照組、左氧氟沙星濃度30、60、90μg/ml的相對ct值(/β-actin)分別為:0.21?0.05、0.45?0.06、0.61?0.03、0.81?0.03。其組間差異具有統(tǒng)計學意義。結論:研究結果表明,左氧氟沙星對大鼠纖維環(huán)細胞有細胞毒性作用--通過增加細胞的凋亡,降低細胞的活力,提高caspase-3、MMP-3等凋亡蛋白的表達率。提示了喹諾酮類藥物對大鼠纖維環(huán)細胞的潛在的毒性作用。
【關鍵詞】：左氧氟沙星 腰椎退變凋亡 纖維環(huán)細胞 基質金屬蛋白酶 caspase-3
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-18
• 結果18-20
• 附圖20-24
• 附表24-25
• 討論25-27
• 結論27
• 參考文獻27-32
• 綜述 喹諾酮類藥物及其化合物誘導細胞凋亡的研究進展32-38
• 參考文獻36-38
• 致謝38-39
• 個人簡歷39

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 付建民;王德輝;孫金平;康玉華;皇甫超申;胡國強;劉彬;;對甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙誘導人肝癌SMMC-7721細胞凋亡的作用[J];中國藥理學通報;2011年06期

2 任爭;康玉華;石貞玉;皇甫超申;胡國強;劉彬;;肉桂醛氧氟沙星酰腙誘導人肝癌SMMC-7721細胞凋亡的作用[J];藥學學報;2010年09期

  本文關鍵詞：左氧氟沙星對大鼠纖維環(huán)細胞的毒性作用的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：357646