本文關(guān)鍵詞：核心蛋白聚糖中復雜糖胺聚糖鏈結(jié)構(gòu)及其抗腫瘤活性的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：核心蛋白聚糖(Decorin),由一個核心蛋白和一條糖胺聚糖鏈共價連接而成,是細胞間基質(zhì)中的組分,可以和許多細胞表面受體和其它細胞間基質(zhì)組分相互作用從而發(fā)揮多種生物活性,尤其是抗腫瘤活性。近年來,對Decorin的臨床研究有很多,它的臨床應用價值日益明顯,作為一種天然大分子,人們正期待著它能夠成為一種有效的抗腫瘤藥物應用于臨床。隨著人們對Decorin關(guān)注的增多以及現(xiàn)代研究水平的進步,Decorin的結(jié)構(gòu)研究有了進一步的發(fā)展。一直以來,Decorin的核心蛋白部分被研究的比較多,它的序列解析和空間結(jié)構(gòu)已相對明確,而糖胺聚糖鏈由于其結(jié)構(gòu)極其復雜且具有組織特異性,對它的研究目前并不完全清楚。本課題針對Decorin的糖胺聚糖鏈圍繞以下問題進行展開:1.Decorin糖胺聚糖鏈具有怎樣的結(jié)構(gòu)?2.不同組織來源的Decorin是否具有不同的糖胺聚糖鏈結(jié)構(gòu)?3.具有不同糖胺聚糖鏈結(jié)構(gòu)的Decorin是否會產(chǎn)生不同的生物學活性?針對以上問題,該工作首先針對不同來源Decorin制備方法進行了大量的嘗試;之后通過微量二糖分析和建立的高效微量液質(zhì)聯(lián)用寡糖分析方法對兩種來源的Decorin糖胺聚糖鏈進行了結(jié)構(gòu)解析與比較;最后本實驗以肺癌細胞H1299作為研究模型,分別從其增殖與遷移兩方面考察了不同來源核心蛋白(Decorin-C和Decorin-D)的抗腫瘤作用。該工作首先建立了一套高效和完善的制備工藝,分別從豬軟骨和豬皮組織中制備得到了一定量的Decorin樣品,具有較高的得率。該工藝為Decorin的后續(xù)研究奠定了非常扎實的基礎(chǔ)。其次,該工作建立了一套針對具有不同電荷密度糖胺聚糖寡糖的液質(zhì)聯(lián)用分析方法,并在Decorin糖胺聚糖寡糖分析工作中得到了應用,證實了不同來源的Decorin有著不同的CS/DS構(gòu)成比例和序列。同時,通過微量二糖分析發(fā)現(xiàn)兩種來源的Decorin糖胺聚糖在硫酸根分布上存在明顯的差異。最后,該工作發(fā)現(xiàn)這兩種具有不同糖胺聚糖結(jié)構(gòu)的Decorin表現(xiàn)出了不同的抗腫瘤活性。以上工作標明不同糖基化Decorin表現(xiàn)出了不同的抗腫瘤活性。
【關(guān)鍵詞】：核心蛋白聚糖(Decorin) 糖胺聚糖 結(jié)構(gòu)解析 抗腫瘤
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R917;R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 引言11-18
• 1.1 Decorin簡介11-12
• 1.2 Decorin的生物學活性12-13
• 1.3 Decorin的抗腫瘤作用機制13-14
• 1.4 Decorin的臨床研究現(xiàn)狀14-15
• 1.5 Decorin的結(jié)構(gòu)研究15-17
• 1.5.1 Decorin中核心蛋白結(jié)構(gòu)研究15-16
• 1.5.2 Decorin中GAG鏈結(jié)構(gòu)解析16-17
• 1.6 本論文研究的主要內(nèi)容17-18
• 第二章Decorin的制備工藝建立18-38
• 2.1 前言18-20
• 2.2 組織勻漿及蛋白提取20-22
• 2.2.1 基本原理-蛋白變性提取20
• 2.2.2 實驗部分20-22
• 2.2.3 實驗結(jié)果與分析22
• 2.3 蛋白樣品的分離22-25
• 2.3.1 基本原理— 強陰離子交換色譜22-23
• 2.3.2 實驗部分23-24
• 2.3.3 實驗結(jié)果與分析24-25
• 2.4 蛋白樣品的純化25-29
• 2.4.1 基本原理-切向流超濾器25-27
• 2.4.2 實驗部分27
• 2.4.3 實驗結(jié)果與分析27-29
• 2.5 Decorin樣品的純度分析29-32
• 2.5.1 基本原理29-30
• 2.5.2 實驗部分30-32
• 2.5.3 實驗結(jié)果與分析32
• 2.6 樣品的western驗證32-35
• 2.6.1 基本原理—western blot32-33
• 2.6.2 實驗部分33-35
• 2.6.3 實驗結(jié)果與分析35
• 2.7 本章總結(jié)35-38
• 第三章Decorin糖胺聚糖鏈的結(jié)構(gòu)解析38-59
• 3.1 前言38
• 3.2 Decorin糖胺聚糖鏈的制備38-42
• 3.2.1 糖胺聚糖鏈的制備38-40
• 3.2.2 Decorin糖胺聚糖鏈凝膠電泳分析40-42
• 3.2.3 實驗結(jié)果與分析42
• 3.3 Decorin糖胺聚糖鏈的二糖分析42-48
• 3.3.1 基本原理（反相離子對色譜法）42-43
• 3.3.2 實驗部分43-45
• 3.3.3 實驗結(jié)果與分析45-48
• 3.4 Decorin糖胺聚糖鏈的寡糖分析（新建色譜方法的應用）48-57
• 3.4.1 前言-糖胺聚糖寡糖高效分析方法的開發(fā)與建立48-52
• 3.4.2 基本原理（HILIC）52
• 3.4.3 實驗部分52-54
• 3.4.4 實驗結(jié)果與分析54-57
• 3.5 本章總結(jié)57-59
• 第四章Decorin生物活性測試59-66
• 4.1 前言59
• 4.2 細胞增殖抑制實驗59-61
• 4.2.1 實驗原理-磺酰羅丹明B（sulforodamine B，， SRB） 法59-60
• 4.2.2 儀器與試劑60
• 4.2.3 實驗方法60-61
• 4.2.4 實驗結(jié)果與分析61
• 4.2.5 討論61
• 4.3 細胞遷移61-64
• 4.3.1 實驗原理- Transwell遷移實驗原理61-62
• 4.3.2 儀器與試劑62
• 4.3.3 實驗方法62-63
• 4.3.4 結(jié)果與分析63-64
• 4.4 討論64-66
• 論文總結(jié)與展望66-67
• 參考文獻67-73
• 攻讀學位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文73-74
• 致謝74-75

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  本文關(guān)鍵詞：核心蛋白聚糖中復雜糖胺聚糖鏈結(jié)構(gòu)及其抗腫瘤活性的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：351449