本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后的人真皮成纖維細(xì)胞增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、端粒酶mRNA的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:成纖維細(xì)胞的異常增生或膠原蛋白的代謝失衡是病理性瘢痕和纖維化疾病致病原因之一[1]。端粒對(duì)于保持染色體穩(wěn)定性和細(xì)胞活性有重要作用,端粒酶能通過延長(zhǎng)縮短的端粒來增強(qiáng)體外細(xì)胞的增殖能力。端粒酶催化亞單位TERT是其關(guān)鍵的限速酶[2]。目前已有研究證明瘢痕疙瘩中成纖維細(xì)胞端粒酶活性明顯增高[3]。近年來,沙利度胺在治療纖維化性皮膚病及人類其他臟器的纖維化疾病的相關(guān)報(bào)道越來越多,國(guó)內(nèi)外已有研究證實(shí)沙利度胺對(duì)纖維化性皮膚病及其他臟器的纖維化疾病均有抑制作用[4-5]。在沙利度胺和端粒酶作用的相關(guān)研究中,有結(jié)果顯示沙利度胺可通過下調(diào)h TERTm RNA轉(zhuǎn)錄水平,抑制端粒酶活性來誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖[6]。組胺作為皮膚纖維化疾病活化刺激因素之一,它可促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及促進(jìn)膠原蛋白合成[7],與病理性瘢痕的形成關(guān)系密切[8]。目前,關(guān)于沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞增殖及膠原的表達(dá)的直接影響尚無報(bào)道;關(guān)于沙利度胺對(duì)經(jīng)組胺刺激活化后成纖維細(xì)胞增殖活性、I、III型膠原蛋白及端粒酶的直接影響也未見報(bào)道。因此,本研究檢測(cè),經(jīng)組胺刺激后,活化增生的成纖維細(xì)胞在沙利度胺干預(yù)后,對(duì)其增殖活性、端粒酶活性及I、III型膠原蛋白m RNA的直接作用,以探討沙利度胺在抑制活化后的成纖維細(xì)胞的增殖、降低其端粒酶活性及膠原表達(dá)方面的直接作用,從而研究沙利度胺在抗真皮纖維化的潛在作用,為防止術(shù)后瘢痕形成及對(duì)病理性瘢痕的臨床治療和預(yù)后提供新的指導(dǎo)思路。目的:探索沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后的成纖維細(xì)胞增殖及I、III型膠原蛋白、端粒酶活性的m RNA表達(dá)的直接影響。方法:1正常真皮成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng),并經(jīng)波形蛋白免疫組化染色,行細(xì)胞鑒定,取第4代細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。2 CCK-8測(cè)正常成纖維細(xì)胞增殖活性:細(xì)胞消化后接種于96孔培養(yǎng)板中,每組均設(shè)置5個(gè)重復(fù)孔,各組分別中加入含有濃度分別為0(空白對(duì)照組)、10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L含沙利度胺的DMEM培養(yǎng)基,用CCK-8法檢測(cè)沙利度胺作用24h后細(xì)胞在560nm處的光密度值(OD值),對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3實(shí)驗(yàn)分組及CCK-8測(cè)經(jīng)組胺刺激后的成纖維細(xì)胞增殖活性實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(K組)、沙利度胺處理組(S組)、組胺處理組(Z組)、組胺+沙利度胺處理組(Z+S組)。取成纖維細(xì)胞單細(xì)胞懸液,濃度為2×104/ml,每孔200ul接種于96孔板,Z組及Z+S組分別加入200ul 100UM的組胺工作液,K組及S組加等量空白培養(yǎng)液,共同培養(yǎng)48小時(shí)。棄去各組培養(yǎng)液,S組及Z+S組更換10-5mol/L沙利度胺液,其余兩組加入等量DMEM.每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。采用上述CCK-8法測(cè)得OD值,并對(duì)以上數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。4采用SYBR Green I染料法熒光定量PCR測(cè)定COL-I、COL-IIIm RNA的表達(dá)情況及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析按上述分組要求處理細(xì)胞,每組設(shè)三個(gè)樣本,均接種在25m L培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。24h后提取各組總RNA。應(yīng)用熒光定量PCR對(duì)COL-I、COL-IIIm RNA基因的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定,并用以上測(cè)得數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。5采用SYBR Green I染料法熒光定量PCR測(cè)定h TERT m RNA的表達(dá)情況及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析按上述分組中Z組、Z+S組要求分別處理得到兩組細(xì)胞,按方法4得到h TERT m RNA基因的表達(dá)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果:1 CCK-8的結(jié)果顯示:1.1沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞增殖能力的影響:濃度為0(空白對(duì)照組)、10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L組OD值分別為:1.1618±0.0783、0.898±0.0461、1.0761±0.0582、1.147±0.050,四個(gè)處理組的細(xì)胞活性不全相等(P0.05),組內(nèi)比較結(jié)果顯示:10-3、10-4mol/L濃度沙利度較0組相比,細(xì)胞增殖受到抑制(P0.05);10-5mol/L沙利度胺較0組比較,細(xì)胞增殖無明顯差異(P0.05)。1.2沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后人真皮成纖維細(xì)胞增殖活性的影響:K組、S組、Z組、Z+S組,各組OD值分別為:1.1618±0.0783、1.147±0.050、1.4182±0.0226、1.186±0.0515,四個(gè)處理組的細(xì)胞活性不全相等(P=0.000),組內(nèi)比較結(jié)果示:Z組較K組細(xì)胞活性增強(qiáng),兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Z+S組較Z組細(xì)胞活性受到抑制,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P0.05)結(jié)果提示:10-3mol/L、10-4mol/L濃度的沙利度胺可明顯抑制正常成纖維細(xì)胞的增殖活性、100UM濃度的組胺可使人正常成纖維細(xì)胞增殖活性升高、10-5mol/L沙利度胺對(duì)正常細(xì)胞增殖活性無明顯抑制作用,但對(duì)組胺激活后的成纖維細(xì)胞增殖活性有明顯抑制作用。2沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞COL-I、COL-IIIm RNA的影響。K組、S組、Z組、Z+S組所得COL-Im RNARQ值分別為1.0157±0.0025、0.6577±0.0317、1.7693±0.0358、0.2557±0.0235。各組RQ值不全相等(P=0.000),組內(nèi)比較結(jié)果示,S組較K組成纖維細(xì)胞COL-Im RNA RQ值降低,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Z組較K組成纖維細(xì)胞COL-Im RNA RQ值明顯升高,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Z+S組較Z組相比COL-Im RNA RQ值降低,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),結(jié)果提示:100UM濃度的組胺可使正常人成纖維細(xì)胞COL-Im RNA表達(dá)升高,10-5mol/L濃度沙利度胺對(duì)正常成纖維細(xì)胞COL-Im RNA的表達(dá)存在抑制作用,但對(duì)組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞的COL-Im RNA的表達(dá)抑制作用更明顯。K組、S組、Z組、Z+S組所得COL-IIIm RNARQ值分別為:0.988±0.012、0.826±0.018、1.531±0.047、0.746±0.027,對(duì)所要研究比較的K組和Z組、K組和S組、Z+S組和Z組所得RQ值分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,Z組較K組COL-IIIm RNARQ值升高,兩者有顯著差異(P=0.001);S組較K組COL-IIIm RNARQ值降低,兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);Z+S組較Z組COL-IIIm RNARQ降低,兩者有顯著差異(P=0.000),提示100UM濃度的組胺可使正常人成纖維細(xì)胞COL-IIIm RNA表達(dá)升高,10-5mol/L濃度沙利度胺對(duì)正常成纖維細(xì)胞COL-IIIm RNA的表達(dá)存在抑制作用,但對(duì)組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞的COL-IIIm RNA的表達(dá)抑制作用更明顯。3沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞h TERTm RNA的影響Z組、Z+S組所得h TERT m RNARQ值分別為:1.850±0.054、0.984±0.043,Z+S組較Z組h TERT m RNARQ值明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),提示沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞h TERT m RNA的表達(dá)有抑制作用。結(jié)論:1經(jīng)濃度為100UM的組胺誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞增殖活性、COL-I、III m RNA的表達(dá)明顯升高。2經(jīng)組胺(100UM)活化后的成纖維細(xì)胞,在濃度為10-5mol/L沙利度胺的作用下,其細(xì)胞增殖活性、COL-I、III和h TERT m RNA的表達(dá)明顯受到抑制。3該研究為沙利度胺應(yīng)用于治療病理性瘢痕的可能性以及更進(jìn)一步的研究提供理論依據(jù)
【關(guān)鍵詞】：沙利度胺 組胺 人真皮成纖維細(xì)胞 膠原蛋白I、III型、端粒酶mRNA 增殖
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-28
• 附表28-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述 端粒、端粒酶和皮膚科疾病40-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對(duì)組胺誘導(dǎo)后的人真皮成纖維細(xì)胞增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、端粒酶mRNA的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：336160