本文關(guān)鍵詞：3種誘導(dǎo)劑對大鼠肝臟CYP2E1表達及肝損傷相關(guān)酶的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：CYP2E1為CYP450酶家族中重要成員之一，其主要功能是代謝小分子化合物。CYP2E1的底物多為前毒物或前致癌物，經(jīng)其代謝后可產(chǎn)生毒性效應(yīng)，因此關(guān)于CYP2E1的研究在藥物毒理學(xué)方面具有重要意義。咪唑、吡唑和對乙酰氨基酚是CYP2E1代謝底物中的不同類型小分子化合物，可影響CYP2E1的表達或酶的活性。本研究探討咪唑、吡唑和對乙酰氨基酚在24h內(nèi)對CYP2E1表達的調(diào)控以及對肝臟損傷的作用，為探索CYP2E1的毒性機制奠定理論基礎(chǔ)。 180只SD雄性大鼠隨機分為三個批次進行咪唑、對乙酰氨基酚、吡唑?qū)Υ笫蟮恼T導(dǎo)實驗。咪唑的60只大鼠分為空白對照組和低、中、高濃度藥物組，每組15只，腹腔注射給藥后，分別在1h、6h和24h每組隨機選取5只大鼠，采血并分離肝臟，-80℃保存?zhèn)溆谩σ阴０被雍瓦吝蚍纸M與咪唑相同。應(yīng)用qRT-PCR測定大鼠肝臟CYP2E1mRNA的表達水平，Western Blot法測定CYP2E1的蛋白表達量，紫外分光光度計法測定CYP2E1的酶活性，比色法測定血漿或肝臟中6種酶的變化。 實驗結(jié)果表明，，3種藥物對CYP2E1mRNA表達水平無顯著影響（P0.05）。與對照組比較，在1h和6h咪唑組大鼠肝臟CYP2E1的蛋白表達量及酶活性無顯著變化，24h則明顯升高且呈現(xiàn)劑量依賴性；在1h、6h吡唑組大鼠肝臟CYP2E1的蛋白表達量及酶活性顯著升高（P0.05），24h下降并恢復(fù)正常；對乙酰氨基酚組的大鼠肝臟CYP2E1蛋白表達量則與給藥劑量和給藥時間呈劑量依賴性，而酶活性只在24h顯著升高。3種藥物都引起血漿中AST、ALT、ALP酶活性的升高，肝組織中GSH、SOD酶活性的降低以及MDA含量的升高。 綜上所述，在24h內(nèi)，咪唑、吡唑和對乙酰氨基酚對CYP2E1的誘導(dǎo)作用主要是通過影響CYP2E1的蛋白表達量及酶活性，而不是調(diào)節(jié)CYP2E1mRNA表達量。但各種藥物對大鼠肝臟CYP2E1的蛋白表達量及酶活性的影響存在時間上的差異。咪唑及吡唑高劑量在24h引起大鼠肝臟輕度損傷，對乙酰氨基酚對肝臟損傷程度則呈現(xiàn)劑量時間依賴性。
【關(guān)鍵詞】：CYP2E1 咪唑 吡唑 對乙酰氨基酚 肝臟
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 符號說明6-10
• 第一章 文獻綜述10-20
• 1.1 細胞色素 P45010-13
• 1.1.1 CYP450 分布10
• 1.1.2 CYP450 功能10-12
• 1.1.3 CYP450 分類12
• 1.1.4 CYP450 誘導(dǎo)及抑制12-13
• 1.2 細胞色素 P4502E113-18
• 1.2.1 CYP2E1 發(fā)現(xiàn)史13-14
• 1.2.2 CYP2E1 功能14
• 1.2.3 CYP2E1 分布及蛋白結(jié)構(gòu)14-15
• 1.2.4 CYP2E1 底物分類及探針15-16
• 1.2.5 CYP2E1 基因多態(tài)性16-17
• 1.2.6 CYP2E1 誘導(dǎo)劑和抑制劑17-18
• 1.3 研究目的與意義18-20
• 第二章 誘導(dǎo)物對大鼠肝臟 CYP2E1 mRNA 的影響20-30
• 2.1 實驗材料20-21
• 2.1.1 實驗動物20
• 2.1.2 實驗藥品與試劑20
• 2.1.3 實驗儀器20-21
• 2.1.4 主要溶液的配制21
• 2.2 實驗方法21-24
• 2.2.1 動物分組及給藥21
• 2.2.2 提取大鼠肝臟總 RNA21-22
• 2.2.3 mRNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA22
• 2.2.4 克隆測序驗證引物22-23
• 2.2.5 實時熒光定量 PCR 檢測23-24
• 2.2.6 數(shù)據(jù)分析24
• 2.3 實驗結(jié)果24-27
• 2.3.1 RNA 完整性24
• 2.3.2 梯度 PCR24-25
• 2.3.3 膠回收電泳25
• 2.3.4 測序結(jié)果25
• 2.3.5 熒光定量 PCR 檢測結(jié)果25-27
• 2.4 討論27-30
• 第三章 誘導(dǎo)物對大鼠肝臟 CYP2E1 的影響30-44
• 3.1 實驗材料30-33
• 3.1.1 實驗動物30
• 3.1.2 實驗藥品與試劑30
• 3.1.3 實驗儀器30
• 3.1.4 主要溶液的配制30-33
• 3.2 實驗方法33-36
• 3.2.1 實驗動物分組及給藥33
• 3.2.2 BCA 法測蛋白濃度33-34
• 3.2.3 Western Blot 檢測 CYP2E1 蛋白表達34-36
• 3.2.4 CYP2E1 活性測定36
• 3.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析36
• 3.3 實驗結(jié)果36-41
• 3.3.1 CYP2E1 活性測定標(biāo)準(zhǔn)曲線36-37
• 3.3.2 咪唑?qū)Υ笫蟾闻K CYP2E1 蛋白表達及酶活性的影響37-38
• 3.3.3 吡唑?qū)Υ笫蟾闻K CYP2E1 蛋白表達及酶活性的影響38-39
• 3.3.4 對乙酰氨基酚對大鼠肝臟 CYP2E1 蛋白表達及酶活性的影響39-41
• 3.4 討論41-44
• 第四章 誘導(dǎo)物對大鼠血漿及肝組織中酶的影響44-56
• 4.1 實驗材料44
• 4.1.1 實驗動物44
• 4.1.2 實驗藥品與試劑44
• 4.1.3 實驗儀器44
• 4.2 實驗方法44-46
• 4.2.1 肝組織勻漿與血漿制備44
• 4.2.2 血漿及肝組織中酶的檢測44-46
• 4.3 實驗結(jié)果46-53
• 4.3.1 咪唑?qū)Υ笫笱獫{及肝組織中酶的影響46-48
• 4.3.2 吡唑?qū)Υ笫笱獫{及肝組織中酶的影響48-50
• 4.3.3 對乙酰氨基酚對血漿及肝組織中酶的影響50-53
• 4.4 討論53-56
• 第五章 結(jié)論56-58
• 參考文獻58-68
• 致謝68-70
• 個人簡歷70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭波;黃海燕;劉建軍;王曉梅;;CYP1A1、CYP2E1基因多態(tài)性與癌癥易感性的研究進展[J];癌變·畸變·突變;2010年03期

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4 王睿,向倩,陳

本文編號：335734