本文關鍵詞：HDAC抑制劑及HDAC1siRNA對TGF-β1誘導的肺泡Ⅱ型上皮細胞EMT的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景與目的】組蛋白乙�；窃诮M蛋白乙�；D移酶(Histone acetyltransferases,HATs)催化下將acetyl Co A的乙酰基轉移到組蛋白賴氨酸ε位的氨基上,在組蛋白去乙�；�(Histone deacetylases,HDACs)催化下可以去掉賴氨酸的乙�；�,在這兩種酶的調節(jié)下組蛋白的乙酰化和去乙�；蕜討B(tài)可逆的過程。而組蛋白去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitors,HDACis)以HDACs為治療靶點,可通過調節(jié)細胞組蛋白和非組蛋白的乙酰化水平而調控基因的表達,促使細胞周期阻滯、誘導細胞凋亡等多種生物學效應,從而抑制腫瘤細胞增殖,增強腫瘤對一些化療藥物的敏感性。最近研究表明,HDAC與以纖維化為特征的慢性疾病發(fā)展相關,包括慢性腎臟疾病、心肌肥厚和特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。目前國內外越來越多的研究證明,肺泡上皮間質轉化在肺纖維化的發(fā)病機制中起著重要的作用,阻止EMT的發(fā)生,可以減輕甚至逆轉成肌纖維細胞(Myofibroblast,MFb)的聚集,有望在早期逆轉纖維化的發(fā)生,從而改善肺纖維化病人的預后。研究發(fā)現(xiàn),HDAC的抑制劑(Histone deacetylase inhibitors,HDACis)-Trichostatin A(TSA)可改善心、肝、腎及皮膚的纖維化,并且應用此抑制劑對正常肝及腎小管細胞幾乎無毒性。而HDACis是否能抑制肺上皮間質轉化及肺纖維化,其在肺纖維化中的具體作用及機制又是怎樣的,目前均未見明確的報道。本課題組前期研究已經(jīng)證明TGF-β1在體外細胞培養(yǎng)過程中能夠誘導肺泡Ⅱ型上皮細胞(Rat lung epithelium-6TN,RLE-6TN)發(fā)生EMT,并且HDAC1參與了TGF-β1誘導的RLE-6TN的EMT過程;本研究通過在體外培養(yǎng)的大鼠RLE-6TN中分別加入HDAC抑制劑和HDAC1si RNA,同時加入外源性TGF-β1,觀察其對TGF-β1誘導的肺泡Ⅱ型上皮細胞HDAC1、8和E-cad、α-SMA的表達情況,明確抑制HDAC1、8表達對RLE-6TN的保護及阻抑肺纖維化的作用機制�！静牧虾头椒ā吭隗w外培養(yǎng)RLE-6TN的過程中,分別采用HDAC1抑制劑TSA及設計、合成HDAC1si RNA,同時加入外源性TGF-β1,采用Real-time RT-PCR及Western Blot檢測HDAC1、HDAC8、上皮細胞特異性標志物(E-cad)及間質細胞特異性標志物(α-SMA)的表達情況,倒置相差顯微鏡觀察TSA及HDAC1si RNA對RLE-6TN細胞形態(tài)的影響,Transwell小室檢測其對RLE-6TN細胞體外遷移能力的影響,免疫熒光檢測其對RLE-6TN細胞的HDAC1、8、E-cad及α-SMA的表達及定位情況,【結果】與空白對照組相比,經(jīng)TSA預處理6h,TGF-β1處理6h時α-SMA m RNA的表達降低(P0.05),E-cad于6h、12h表達上調(雖無明顯統(tǒng)計學意義),HDAC8m RNA于24h、48h表達下調(雖無明顯的統(tǒng)計學意義),HDAC1m RNA表達下調(P0.01);與空白對照組相比,經(jīng)TSA作用后,HDAC1、8蛋白和α-SMA蛋白表達均下調,E-cad蛋白表達上調;Transwell小室檢測發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比,經(jīng)TGF-β1作用后穿過微孔膜的細胞數(shù)目(20×和40×)明顯增多(P0.01),經(jīng)TSA和TGF-β1共同作用后穿過微孔濾膜的細胞數(shù)目(20×和40×)明顯減少(P0.01);RLE-6TN細胞經(jīng)HDAC1 si RNA和TGF-β1共同作用后HDAC1、8m RNA的表達明顯降低(P值均0.01);RLE-6TN細胞經(jīng)HDAC1 si RNA和TGF-β1共同作用后HDAC1蛋白的表達明顯降低(P0.01);Transwell小室檢測發(fā)現(xiàn)加入HDAC1si RNA后的結果同TSA處理后的結果;免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),與空白對照組相比,TGF-β1組E-cad蛋白表達減弱;與空白對照組比較,TGF-β1組α-SMA蛋白表達增強,加入TSA后其表達減弱;與對照組、TSA組及TSA+TGF-β1組)比較,TGF-β1組HDAC1蛋白表達增強,定位于細胞核;HDAC1si RNA組各標志物及HDAC1、8蛋白表達同TSA處理后的結果;與不加TGF-β1組及TSA預處理組相比,加入TGF-β1到RLE-6TN細胞后48h,其細胞間隙變大,離散成單個,形態(tài)成梭形、紡錘形,TSA預處理6h后添加TGF-β1到RLE-6TN細胞后48h,細胞間隙小,細胞趨于融合成片;HDAC1si RNA組細胞形態(tài)的改變同TSA處理組�！窘Y論】在體外培養(yǎng)的RLE-6TN細胞中,HDAC抑制劑TSA及HDAC1si RNA干擾可抑制其獲得α-SMA表型、失去E-cad表型,從而部分逆轉TGF-β1誘導的肺泡上皮EMT。
【關鍵詞】：組蛋白去乙酰化酶抑制劑 上皮細胞間質轉變 HDAC1siRNA干擾 肺纖維化 TGF-β1
【學位授予單位】：大理學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮略語注釋4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結果24-48
• 討論48-53
• 結論與展望53-54
• 參考文獻54-60
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文60
• 文獻綜述60-68
• 參考文獻65-68
• 致謝68-69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 呂琳;吳少瑜;饒進軍;;組蛋白乙酰轉移酶和去乙�；傅难芯縖J];現(xiàn)代醫(yī)院;2008年04期

  本文關鍵詞：HDAC抑制劑及HDAC1siRNA對TGF-β1誘導的肺泡Ⅱ型上皮細胞EMT的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：335465