本文關(guān)鍵詞：ApoE修飾陽(yáng)離子脂質(zhì)體的制備及其功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:1.自制普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體。2.將普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體與apo E(載脂蛋白E)偶聯(lián),構(gòu)建一種新型的具有與肝(癌)細(xì)胞結(jié)合特異性的轉(zhuǎn)染載體,即apo E修飾脂質(zhì)體。3.分別檢測(cè)自制普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體和apo E修飾脂質(zhì)體對(duì)人正常肝細(xì)胞株HL-7702和人肝癌細(xì)胞株HepG2、HuH-7和Li-7的轉(zhuǎn)染特異性和轉(zhuǎn)染效率。4.探索不同apo E含量的apo E修飾脂質(zhì)體對(duì)三種肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,并探索apo E修飾脂質(zhì)體的儲(chǔ)備時(shí)間是否對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有影響。5.檢測(cè)自制普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體與apoE修飾脂質(zhì)體對(duì)HepG2細(xì)胞是否具有細(xì)胞毒性作用。研究方法:1.乙醇注入法和擠壓法聯(lián)合制備普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體。2.將載脂蛋白E與普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體偶聯(lián),制備apoE修飾脂質(zhì)體。3.將普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體和apoE修飾脂質(zhì)體分別與pGenesil-1質(zhì)�；靹颉⒎跤�,確定最佳的轉(zhuǎn)染比例。4.分別使用普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體和apo E修飾脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察報(bào)告基因綠色熒光蛋白EGFP的表達(dá)以檢測(cè)apoE修飾脂質(zhì)體對(duì)HL-7702正常肝細(xì)胞、HepG2、HuH-7和Li-7肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染特異性。5.制備不同apoE含量的apo E修飾脂質(zhì)體,分別轉(zhuǎn)染HepG2、HuH-7肝癌細(xì)胞,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)篩選轉(zhuǎn)染率最高的apoE修飾脂質(zhì)體,確定脂質(zhì)體中apoE的最佳負(fù)載量。6.儲(chǔ)備時(shí)間不同的apo E修飾脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞,熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析apoE修飾脂質(zhì)體的儲(chǔ)備時(shí)間是否對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有影響。7.瓊脂糖凝膠電泳分析apoe修飾脂質(zhì)體-質(zhì)粒dna復(fù)合物與普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體-質(zhì)粒dna復(fù)合物在dnaseⅠ溶液中的穩(wěn)定性。8.脂質(zhì)體對(duì)hepg2肝癌細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn),通過(guò)mtt法研究普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體和apoe修飾脂質(zhì)體對(duì)hepg2的細(xì)胞毒性作用。研究結(jié)果:1.普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體制備完成后,使用pgenesil-1質(zhì)粒進(jìn)行包裹實(shí)驗(yàn),確定普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體:pgenesil-1質(zhì)粒的最佳結(jié)合比例為0.5μl:2.5μg。2.apoe修飾脂質(zhì)體制備完成后,使用pgenesil-1質(zhì)粒進(jìn)行包裹實(shí)驗(yàn),確定apoe修飾脂質(zhì)體:pgenesil-1質(zhì)粒的最佳結(jié)合比例為2μl:2.5μg。3.兩種脂質(zhì)體介導(dǎo)pgenesil-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三種肝癌細(xì)胞、正常肝細(xì)胞和其他腫瘤細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡觀察,證實(shí)apoe修飾脂質(zhì)體對(duì)三種肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞具有結(jié)合特異性。4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,當(dāng)apoe負(fù)載量為6.6μg/ml時(shí),轉(zhuǎn)染率最高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.流式細(xì)胞術(shù)證實(shí),隨著apoe修飾脂質(zhì)體儲(chǔ)備時(shí)間的增長(zhǎng),其對(duì)hepg2肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.mtt實(shí)驗(yàn)未觀察到兩種脂質(zhì)體對(duì)hepg2細(xì)胞有明顯的毒性作用(p0.05)。研究結(jié)論:1.apoe修飾脂質(zhì)體較普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體具有更高的轉(zhuǎn)染效率,apoe修飾脂質(zhì)體中apoe的負(fù)載量不同,細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率也不同。2.隨著apoe修飾脂質(zhì)體儲(chǔ)備時(shí)間的增長(zhǎng),apoe修飾脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率呈下降趨勢(shì)。3.未觀察到apoe修飾脂質(zhì)體和普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)hepg2細(xì)胞的明顯毒性作用。
【關(guān)鍵詞】：載脂蛋白E 肝細(xì)胞 肝癌細(xì)胞 普通陽(yáng)離子脂質(zhì)體 apo E修飾脂質(zhì)體
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表12-14
• 前言14-16
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-22
• 1.1 細(xì)胞株16
• 1.2 菌株16
• 1.3 質(zhì)粒16
• 1.4 主要試劑16-18
• 1.5 主要實(shí)驗(yàn)器材和儀器18-19
• 1.6 試劑的配制19-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 2.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化22
• 2.2 細(xì)菌的擴(kuò)大培養(yǎng)22
• 2.3 質(zhì)粒DNA的提取22-23
• 2.4 質(zhì)粒DNA濃度的測(cè)定23
• 2.5 菌液的保存23
• 2.6 細(xì)胞培養(yǎng)23-24
• 2.7 載脂蛋白apo E修飾脂質(zhì)體的構(gòu)建24-25
• 2.8 脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)25
• 2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染25-26
• 2.10 轉(zhuǎn)染效率的測(cè)定26
• 2.11 Apo E修飾脂質(zhì)體特異性的鑒定26-27
• 2.12 Apo E修飾脂質(zhì)體中apoE最佳負(fù)載量的篩選27
• 2.13 Apo E修飾脂質(zhì)體儲(chǔ)備時(shí)間對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的影響27
• 2.14 SDS破裂脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物實(shí)驗(yàn)27
• 2.15 脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物在DNaseⅠ中的穩(wěn)定性27-28
• 2.16 脂質(zhì)體對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性檢測(cè)28-30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-48
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)30-31
• 3.2 質(zhì)粒圖譜31
• 3.3 脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒DNA實(shí)驗(yàn)31-32
• 3.4 Apo E修飾脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染特異性實(shí)驗(yàn)32-36
• 3.5 Apo E修飾脂質(zhì)體中apoE最佳負(fù)載量的篩選36-41
• 3.6 Apo E修飾脂質(zhì)體儲(chǔ)備時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響41-43
• 3.7 SDS對(duì)apoE修飾脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物的裂解43-44
• 3.8 Apo E修飾脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物在DNaseⅠ消化液中的穩(wěn)定性44-45
• 3.9 脂質(zhì)體對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性檢測(cè)45-48
• 4 討論48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 綜述53-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-63
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果63-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷64

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 崔燁;王璐;孫瓊;張燦;;寡肽陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為基因載體的體外研究[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

2 張梨;譚群友;劉雨;陶紹霖;張景R，

本文編號(hào)：321757