本文關鍵詞：ApoE修飾陽離子脂質(zhì)體的制備及其功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:1.自制普通陽離子脂質(zhì)體。2.將普通陽離子脂質(zhì)體與apo E(載脂蛋白E)偶聯(lián),構(gòu)建一種新型的具有與肝(癌)細胞結(jié)合特異性的轉(zhuǎn)染載體,即apo E修飾脂質(zhì)體。3.分別檢測自制普通陽離子脂質(zhì)體和apo E修飾脂質(zhì)體對人正常肝細胞株HL-7702和人肝癌細胞株HepG2、HuH-7和Li-7的轉(zhuǎn)染特異性和轉(zhuǎn)染效率。4.探索不同apo E含量的apo E修飾脂質(zhì)體對三種肝癌細胞的轉(zhuǎn)染效率,并探索apo E修飾脂質(zhì)體的儲備時間是否對細胞轉(zhuǎn)染有影響。5.檢測自制普通陽離子脂質(zhì)體與apoE修飾脂質(zhì)體對HepG2細胞是否具有細胞毒性作用。研究方法:1.乙醇注入法和擠壓法聯(lián)合制備普通陽離子脂質(zhì)體。2.將載脂蛋白E與普通陽離子脂質(zhì)體偶聯(lián),制備apoE修飾脂質(zhì)體。3.將普通陽離子脂質(zhì)體和apoE修飾脂質(zhì)體分別與pGenesil-1質(zhì)�；靹�、孵育,確定最佳的轉(zhuǎn)染比例。4.分別使用普通陽離子脂質(zhì)體和apo E修飾脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細胞,熒光顯微鏡觀察報告基因綠色熒光蛋白EGFP的表達以檢測apoE修飾脂質(zhì)體對HL-7702正常肝細胞、HepG2、HuH-7和Li-7肝癌細胞的轉(zhuǎn)染特異性。5.制備不同apoE含量的apo E修飾脂質(zhì)體,分別轉(zhuǎn)染HepG2、HuH-7肝癌細胞,熒光顯微鏡和流式細胞術篩選轉(zhuǎn)染率最高的apoE修飾脂質(zhì)體,確定脂質(zhì)體中apoE的最佳負載量。6.儲備時間不同的apo E修飾脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細胞,熒光顯微鏡和流式細胞術檢測其轉(zhuǎn)染效率,統(tǒng)計學分析apoE修飾脂質(zhì)體的儲備時間是否對細胞轉(zhuǎn)染有影響。7.瓊脂糖凝膠電泳分析apoe修飾脂質(zhì)體-質(zhì)粒dna復合物與普通陽離子脂質(zhì)體-質(zhì)粒dna復合物在dnaseⅠ溶液中的穩(wěn)定性。8.脂質(zhì)體對hepg2肝癌細胞的毒性實驗,通過mtt法研究普通陽離子脂質(zhì)體和apoe修飾脂質(zhì)體對hepg2的細胞毒性作用。研究結(jié)果:1.普通陽離子脂質(zhì)體制備完成后,使用pgenesil-1質(zhì)粒進行包裹實驗,確定普通陽離子脂質(zhì)體:pgenesil-1質(zhì)粒的最佳結(jié)合比例為0.5μl:2.5μg。2.apoe修飾脂質(zhì)體制備完成后,使用pgenesil-1質(zhì)粒進行包裹實驗,確定apoe修飾脂質(zhì)體:pgenesil-1質(zhì)粒的最佳結(jié)合比例為2μl:2.5μg。3.兩種脂質(zhì)體介導pgenesil-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三種肝癌細胞、正常肝細胞和其他腫瘤細胞,通過熒光顯微鏡觀察,證實apoe修飾脂質(zhì)體對三種肝癌細胞和正常肝細胞具有結(jié)合特異性。4.流式細胞術結(jié)果表明,當apoe負載量為6.6μg/ml時,轉(zhuǎn)染率最高,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。5.流式細胞術證實,隨著apoe修飾脂質(zhì)體儲備時間的增長,其對hepg2肝癌細胞的轉(zhuǎn)染率下降,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。6.mtt實驗未觀察到兩種脂質(zhì)體對hepg2細胞有明顯的毒性作用(p0.05)。研究結(jié)論:1.apoe修飾脂質(zhì)體較普通陽離子脂質(zhì)體具有更高的轉(zhuǎn)染效率,apoe修飾脂質(zhì)體中apoe的負載量不同,細胞轉(zhuǎn)染效率也不同。2.隨著apoe修飾脂質(zhì)體儲備時間的增長,apoe修飾脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率呈下降趨勢。3.未觀察到apoe修飾脂質(zhì)體和普通陽離子脂質(zhì)體對hepg2細胞的明顯毒性作用。
【關鍵詞】：載脂蛋白E 肝細胞 肝癌細胞 普通陽離子脂質(zhì)體 apo E修飾脂質(zhì)體
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-14
• 前言14-16
• 1 實驗材料16-22
• 1.1 細胞株16
• 1.2 菌株16
• 1.3 質(zhì)粒16
• 1.4 主要試劑16-18
• 1.5 主要實驗器材和儀器18-19
• 1.6 試劑的配制19-22
• 2 實驗方法22-30
• 2.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化22
• 2.2 細菌的擴大培養(yǎng)22
• 2.3 質(zhì)粒DNA的提取22-23
• 2.4 質(zhì)粒DNA濃度的測定23
• 2.5 菌液的保存23
• 2.6 細胞培養(yǎng)23-24
• 2.7 載脂蛋白apo E修飾脂質(zhì)體的構(gòu)建24-25
• 2.8 脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒實驗25
• 2.9 細胞轉(zhuǎn)染25-26
• 2.10 轉(zhuǎn)染效率的測定26
• 2.11 Apo E修飾脂質(zhì)體特異性的鑒定26-27
• 2.12 Apo E修飾脂質(zhì)體中apoE最佳負載量的篩選27
• 2.13 Apo E修飾脂質(zhì)體儲備時間對細胞轉(zhuǎn)染效率的影響27
• 2.14 SDS破裂脂質(zhì)體-DNA復合物實驗27
• 2.15 脂質(zhì)體-DNA復合物在DNaseⅠ中的穩(wěn)定性27-28
• 2.16 脂質(zhì)體對HepG2細胞的毒性檢測28-30
• 3 實驗結(jié)果30-48
• 3.1 細胞培養(yǎng)30-31
• 3.2 質(zhì)粒圖譜31
• 3.3 脂質(zhì)體包裹質(zhì)粒DNA實驗31-32
• 3.4 Apo E修飾脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染特異性實驗32-36
• 3.5 Apo E修飾脂質(zhì)體中apoE最佳負載量的篩選36-41
• 3.6 Apo E修飾脂質(zhì)體儲備時間對轉(zhuǎn)染效率的影響41-43
• 3.7 SDS對apoE修飾脂質(zhì)體-DNA復合物的裂解43-44
• 3.8 Apo E修飾脂質(zhì)體-DNA復合物在DNaseⅠ消化液中的穩(wěn)定性44-45
• 3.9 脂質(zhì)體對HepG2細胞的毒性檢測45-48
• 4 討論48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-53
• 綜述53-62
• 參考文獻59-62
• 致謝62-63
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果63-64
• 個人簡歷64

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1 崔燁;王璐;孫瓊;張燦;;寡肽陽離子脂質(zhì)體作為基因載體的體外研究[J];中國藥科大學學報;2013年04期

2 張梨;譚群友;劉雨;陶紹霖;張景R，

本文編號：321757