本文關(guān)鍵詞：甲氨蝶呤對大鼠脊髓損傷的藥效作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：評價傳統(tǒng)抗炎藥甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)對大鼠繼發(fā)性脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)的治療效果,包括對氧化應(yīng)激、炎癥、水腫、神經(jīng)細(xì)胞凋亡機(jī)制的抑制作用,并與經(jīng)典治療SCI藥物甲強(qiáng)龍(methylprednisolone, MP)進(jìn)行比較,以及探索MTX與MP聯(lián)合治療對SCI大鼠運(yùn)動功能及基因表達(dá)譜的影響,探討聯(lián)合作用的分子機(jī)制。從而希望為明確MTX對于SCI的作用效果提供有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),以及為臨床上尋找到更合適的藥物治療方式提供新思路。方法：1.將成年SD大鼠隨機(jī)分為Model組、MTX組、MP組和Sham組,采用連有PinPointTM高精度接觸傳感器的立體撞擊器建立SCI模型。術(shù)后30 min, MTX組頸部皮下注射MTX (0.5mg/kg·BW), MP組尾靜脈注射MP (30mg/kg-BW)。 Model組傷后不做給藥處理,假手術(shù)組僅進(jìn)行T10椎板切除術(shù)。通過ELISA方法檢測傷后3h、6h、12h和48h的MDA、8-iso-PGF2α、4-HNE、3-NT、AOPP、 Protein carbonyl和8-OHdG含量,通過熒光定量PCR方法檢測傷后3h、6h、12h和48h的AQP4、TNF-α、IL-1β、Bax、Bcl-x和Bcl-2的表達(dá)量,并通過免疫組織化學(xué)染色法觀察損傷中心及鄰近區(qū)域的神經(jīng)元存活狀況。2.將成年SD大鼠術(shù)前在ZH-PT計(jì)算機(jī)控制動物實(shí)驗(yàn)跑臺進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練5天。然后隨機(jī)分為Model組、MTX組、MP組.MTX+MP組和Sham組。術(shù)后30 min,MTX組頸部皮下注射MTX (0.5 mg/kg-BW), MP組尾靜脈注射MP (30 mg/kg·BW), MTX+MP組先于傷后30 mmin尾靜脈注射MP (30mg/kg),再于傷后1d起頸部皮下注射MTX (0.3 mg/kg),并隔日給藥,連續(xù)2 w。Model組傷后不做給藥處理,Sham組僅作T10椎板切除術(shù)。應(yīng)用TreadScan步態(tài)分析系統(tǒng)描述術(shù)前及傷后2、4、8 w大鼠的行為學(xué)特征。術(shù)后8 w,處死大鼠,并對脊髓組織進(jìn)行基因表達(dá)譜分析。結(jié)果：1. ELISA結(jié)果顯示MTX治療后七個氧化指標(biāo)含量均較Model組降低,僅在個別時間點(diǎn)與MP組相比抑制效果稍差。PCR定量結(jié)果顯示,MTX治療后AQP4、TNF-α、IL-1β和Bax的mRNA表達(dá)量較Model組降低,Bcl-x和Bcl-2的表達(dá)量較Model組升高,僅在個別時間點(diǎn)恢復(fù)效果不如MP組。MTX組傷后3d時NeuN免疫組化染色觀察到離損傷中心前后3mm和5mm處則較Model的存活神經(jīng)元數(shù)目明顯增多,且與MP組未出現(xiàn)顯著性差異。2.行為學(xué)：① Model組與Sham組比較,擺動時間、跨步時間、最小縱向偏差顯著升高,而瞬間跑速、腳印面積和正常步序顯著降低(P0.05)；②MP組與Model組相比較,各步態(tài)參數(shù)較均有顯著改善(P0.05),但隨著時間延長改善效果不再增加；③MP+MTX組與MP組比較,步態(tài)恢復(fù)效果好,且均于傷后3w或(和)4w表現(xiàn)出顯著差異(P0.05)。基因表達(dá)譜：①M(fèi)odel組與Sham組比較,基因表達(dá)差異體現(xiàn)在生命活動的各個方面；②MP組與Model組比較,上調(diào)基因主要涉及：促神經(jīng)恢復(fù)、抗炎、抗氧化、抗凋亡；下調(diào)基因主要涉及：促氧化、促炎；③MP+MTX組與MP組比較,上調(diào)基因主要涉及：促神經(jīng)恢復(fù)、抗氧化、抗炎、抗凋亡；下調(diào)基因主要涉及：促炎和促凋亡。結(jié)論：1.早期采用MTX治療大鼠SCI可有效抑制氧化應(yīng)激、炎癥、水腫和凋亡機(jī)制的發(fā)生發(fā)展,雖然短期作用效果不如MP明顯,但由于MTX的治療時間靈活,可傷后持續(xù)給藥,因此作用效果可于傷后累加。2.MTX與MP聯(lián)合治療可有效改善SCI大鼠后肢運(yùn)動功能,并對傷后氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡具有較好的抑制作用,恢復(fù)神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)和功能,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 甲氨蝶呤 大鼠 作用機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：江西科技師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 第一章 緒論13-23
• 1.1 研究意義13-14
• 1.2 文獻(xiàn)綜述14-22
• 1.2.1 氧化應(yīng)激14-18
• 1.2.2 氧化應(yīng)激參與脊髓損傷的病理生理機(jī)制18-19
• 1.2.3 脊髓損傷后的抗氧化藥物治療進(jìn)展19-22
• 1.3 結(jié)論與展望22-23
• 第二章 甲氨蝶呤早期治療大鼠脊髓損傷的研究23-55
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-27
• 2.1.1 藥品與試劑23-25
• 2.1.2 溶液配制25-26
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)動物27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-40
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組27-28
• 2.2.2 模型制備28
• 2.2.3 術(shù)后護(hù)理28-29
• 2.2.4 采血及組織取材29
• 2.2.5 分子生物學(xué)檢測29-39
• 2.2.5.1 ELISA檢測30-37
• 2.2.5.2 熒光定量PCR37-38
• 2.2.5.3 免疫組織化學(xué)染色38-39
• 2.2.6 圖像采集39
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析39-40
• 2.3 結(jié)果40-49
• 2.3.1 氧化應(yīng)激40-44
• 2.3.1.1 脂質(zhì)過氧化40-41
• 2.3.1.2 蛋白氧化損傷41-43
• 2.3.1.3 核酸氧化損傷43-44
• 2.3.2 炎癥44-45
• 2.3.3 水腫45-46
• 2.3.4 凋亡46-49
• 2.4 討論49-55
• 第三章 甲氨蝶呤聯(lián)合甲強(qiáng)龍長期治療大鼠脊髓損傷的研究55-91
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料55-58
• 3.1.1 藥品和試劑55-57
• 3.1.2 溶液配制57
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器57-58
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)動物58
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法58-71
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)分組58
• 3.2.2 模型制備58-59
• 3.2.3 術(shù)后護(hù)理59
• 3.2.4 步態(tài)分析59-60
• 3.2.5 組織取材60
• 3.2.6 基因表達(dá)譜分析60-69
• 3.2.6.1 總RNA提取和純化60-64
• 3.2.6.2 mRNA反轉(zhuǎn)錄64-67
• 3.2.6.3 Solexa基因測序和RNA-Seq生物信息學(xué)分析67-69
• 3.2.7 熒光定量PCR驗(yàn)證69-71
• 3.2.8 統(tǒng)計(jì)分析71
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-85
• 3.3.1 運(yùn)動功能評價71-74
• 3.3.2 Solexa基因測序74-83
• 3.3.2.1 SCI造成的損傷前后基因差異表達(dá)74-76
• 3.3.2.2 藥物治療對基因差異表達(dá)的影響76-83
• 3.3.3 熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果83-85
• 3.4 討論85-91
• 3.4.1 步態(tài)分析85-86
• 3.4.2 基因差異表達(dá)分析86-91
• 3.4.2.1 MP治療87-88
• 3.4.2.2 MP+MTX聯(lián)合治療88-91
• 第四章 結(jié)論91-92
• 參考文獻(xiàn)92-104
• 攻讀碩士期間的研究成果104-105
• 致謝105

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1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營養(yǎng)學(xué)報;1957年04期

2 陳偉強(qiáng);趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);2001年03期

6 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國血液流變學(xué)雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長斌;+Gz暴露時間對大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

8 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡易的大鼠保定方法[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);2004年01期

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1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：303280