本文關(guān)鍵詞：NGF對(duì)黏菌素致PC12細(xì)胞自噬和凋亡的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黏菌素(colistin)是多黏菌素類抗菌劑的一種,是對(duì)抗多重耐藥性綠膿桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌引發(fā)感染有效手段。然而黏菌素的神經(jīng)毒性與腎毒性妨礙了它在臨床上的應(yīng)用,隨著革蘭氏陰性菌耐藥性增強(qiáng),黏菌素作為窄譜抗生素在抗菌方面的優(yōu)勢(shì)逐步體現(xiàn)出來(lái)。降低黏菌素的毒副作用,有助于黏菌素在臨床上的應(yīng)用。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NFG)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NT)的一種,能夠在神經(jīng)元受到損傷時(shí)起到保護(hù)神經(jīng)元的作用,增強(qiáng)神經(jīng)元的活性。細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡在細(xì)胞的正常生理活動(dòng)中有重要作用。細(xì)胞通過(guò)自噬可以消化細(xì)胞內(nèi)的長(zhǎng)壽命蛋白以及細(xì)胞器。當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)也可以激活細(xì)胞自噬,例如缺乏氨基酸或者是細(xì)胞生理刺激等。本試驗(yàn)以NGF作為黏菌素毒副作用的保護(hù)劑與黏菌素共同作用于大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12),探究NGF對(duì)細(xì)胞活性的保護(hù)作用以及細(xì)胞自噬在細(xì)胞凋亡中的作用。在之前的研究中我們發(fā)現(xiàn),當(dāng)PC12細(xì)胞在接種125、250μg?mL-1 colistin 12 h時(shí),細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡的程度比較高,并且從western blot試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的Caspase-3蛋白含量在與colistin接觸24 h時(shí)最高。在250μg?mL-1 colistin濃度組中隨著自噬程度的增加,細(xì)胞凋亡越明顯,最終確定黏菌素的濃度為250μg·m L-1。PC12細(xì)胞在終濃度分別為NGF(25、50、100 ng·mL-1)和250μg?mL-1 colistin共同作用12,24 h。細(xì)胞自噬可以通過(guò)單丹磺酰尸胺(MDC)方法觀察細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡,LC3免疫熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞熒光顆粒和蛋白免疫印跡(western blot)測(cè)定細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白。細(xì)胞凋亡可以通過(guò)Hoechst 33258染色染色細(xì)胞核、流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞活力和細(xì)胞線粒體膜電位、及western blot測(cè)定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白等方法檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明:(1)黏菌素能夠引起PC12細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡,250μg?mL-1 colistin與細(xì)胞作用24 h時(shí)凋亡率最高,作用12 h組時(shí)細(xì)胞自噬程度最高。(2)隨著NGF濃度的增加,試驗(yàn)組的PC12細(xì)胞活性提高。(3)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin 1的表達(dá)量以及細(xì)胞凋亡率隨NGF濃度的增加均有所下降。(4)不同濃度的NGF與250μg?m L-1 colistin接觸12,24 h,細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量也有所下降。綜上所述,NGF可以提高PC12細(xì)胞的細(xì)胞活性;高濃度的colistin引起的PC12細(xì)胞的自噬可能對(duì)細(xì)胞凋亡是一種促進(jìn)機(jī)制;NGF不僅能夠抑制colistin介導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡,同時(shí)也可以抑制PC12細(xì)胞自噬。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 自噬 細(xì)胞凋亡 黏菌素 PC12細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要9-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-21
• 1.1 黏菌素概述12-13
• 1.1.1 黏菌素理化性質(zhì)12
• 1.1.2 黏菌素的腎毒性12
• 1.1.3 黏菌素的神經(jīng)毒性12-13
• 1.1.4 黏菌素藥動(dòng)學(xué)13
• 1.1.5 黏菌素抗菌機(jī)理13
• 1.2 神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）13-15
• 1.2.1 NGF的概述13-14
• 1.2.2 NGF信號(hào)傳遞途徑14
• 1.2.3 NGF神經(jīng)保護(hù)作用14
• 1.2.4 NGF臨床應(yīng)用及展望14-15
• 1.3 細(xì)胞自噬15-17
• 1.3.1 細(xì)胞自噬的概述15
• 1.3.2 細(xì)胞自噬的過(guò)程15-16
• 1.3.3 細(xì)胞自噬的兩面性16-17
• 1.3.4 細(xì)胞自噬實(shí)際應(yīng)用17
• 1.4 細(xì)胞凋亡17-19
• 1.4.1 細(xì)胞凋亡的概述17
• 1.4.2 細(xì)胞凋亡調(diào)控因子17
• 1.4.3 細(xì)胞凋亡的過(guò)程17-18
• 1.4.4 細(xì)胞凋亡途徑18-19
• 1.5 課題研究的目的意義19-21
• 2 材料與方法21-35
• 2.1 試驗(yàn)細(xì)胞21
• 2.2 試驗(yàn)設(shè)備21-22
• 2.3 主要試劑22-25
• 2.3.1 主要試劑的配制23
• 2.3.2 其他試劑的配制23-25
• 2.4 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)25-27
• 2.4.1 PC12細(xì)胞的復(fù)蘇25
• 2.4.2 PC12細(xì)胞的傳代25-26
• 2.4.3 PC12細(xì)胞的凍存26
• 2.4.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)26
• 2.4.5 檢測(cè)細(xì)胞活性26-27
• 2.5 NGF對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用27-34
• 2.5.1 試驗(yàn)分組27
• 2.5.2 細(xì)胞活性的檢查27
• 2.5.3 Hoechst 33258熒光染色觀察細(xì)胞活性27
• 2.5.4 MDC熒光染色觀察細(xì)胞自噬情況27
• 2.5.5 免疫熒光染色標(biāo)記細(xì)胞自噬體27-28
• 2.5.6 細(xì)胞透射電鏡檢測(cè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)28
• 2.5.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞活性28-29
• 2.5.8 RT-PCR半定量分析目標(biāo)基因的表達(dá)29-31
• 2.5.9 Western blot分析PC12中相關(guān)蛋白的表達(dá)31-33
• 2.5.10 PC12細(xì)胞MMP的測(cè)定33-34
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34-35
• 3 結(jié)果與分析35-53
• 3.1 細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果35-36
• 3.2 Hoechst33258熒光染色結(jié)果36-38
• 3.3 MDC染色結(jié)果38-39
• 3.4 免疫熒光染色結(jié)果39-40
• 3.5 細(xì)胞透射電鏡的結(jié)果40-42
• 3.6 細(xì)胞流式儀檢測(cè)細(xì)胞活性的結(jié)果42-43
• 3.7 細(xì)胞RT-PCR分析目的基因m RNA的表達(dá)結(jié)果43-50
• 3.7.1 PC12細(xì)胞總RNA提取與鑒定結(jié)果43-44
• 3.7.2 PCR產(chǎn)物凝膠電泳鑒定結(jié)果44-45
• 3.7.3 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果45-50
• 3.8 線粒體膜電位的檢測(cè)結(jié)果50-51
• 3.9 細(xì)胞蛋白免疫印跡結(jié)果51-53
• 4 討論53-56
• 4.1 Colistin誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡和自噬的劑量的確定53
• 4.2 NGF對(duì)細(xì)胞凋亡的影響53
• 4.3 NGF對(duì)細(xì)胞自噬的影響53-54
• 4.4 PC12細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡的關(guān)系54-56
• 5 結(jié)論56-57
• 致謝57-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳達(dá)宏;張良;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療腦外傷所致精神障礙的臨床研究[J];求醫(yī)問(wèn)藥(下半月);2011年10期

2 徐立紅;細(xì)胞凋亡相關(guān)的組合生物標(biāo)志物的分子基礎(chǔ)及其在環(huán)境毒理學(xué)中的意義[J];水生生物學(xué)報(bào);2005年03期

3 陳國(guó)柱;徐元基;杜芝燕;于曉Y，

本文編號(hào)：293252