本文關(guān)鍵詞：蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討蒽醌類化合物T20對擬缺血性損傷后大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Rat Brain Microvascular Endothelial Cells,rBMECs)上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影響及其作用機(jī)制。方法:1、采用原代培養(yǎng)的方法培養(yǎng)rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,用MTT法檢測化合物T20對rBMECs增殖的影響;運(yùn)用Transwell建立rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系,在共培養(yǎng)體系內(nèi)室加入化合物T20,測定外室、內(nèi)室羅丹明123(Rhodamine123,Rh123)的表觀滲透系數(shù)(Apparent Permeability Coefficient,Papp)以反映rBMECs上P-gp功能的變化;測定外室熒光素鈉(Fluorescein Sodium Injection,NaF)的Papp以確保rBMECs緊密連結(jié)的完整性;采用Western Blot法測定T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp表達(dá)的影響。2、用MTT法檢測不同濃度的Na_2S_2O_4對原代培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷6小時的存活率,Na_2S_2O_4作用于共培養(yǎng)體系外室的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,測定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值;在共培養(yǎng)體系外室加入Na_2S_2O_4內(nèi)室加入化合物T20,測定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值;采用Western Blot法測定T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp表達(dá)的影響。3、用MTT法檢測不同濃度的PD(PD98059,MEK抑制劑)、PDTC(Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,NF-κB活化抑制劑)和ZnPP(Zinc protoporphyrin,HO-1抑制劑)對rBMECs增殖的影響,在共培養(yǎng)體系外室加入阿司匹林(Aspirin,ASA)、內(nèi)室加入化合物T20或PD、PDTC、ZnPP,測定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值;采用Western Blot法測定神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中TNF-α,rBMECs中p-ERK、p-IκB-α、HO-1和P-gp的變化。結(jié)果:1、蒽醌類化合物T20能夠濃度依賴性的下調(diào)rBMECs上P-gp的功能和表達(dá)。2、終濃度為3.75mM的Na_2S_2O_4損傷神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞后可上調(diào)rBMECs上P-gp的功能;蒽醌類化合物T20能夠濃度依賴性的下調(diào)擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的功能和表達(dá)。3、蒽醌類化合物T20通過抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中TNF-α的表達(dá),抑制rBMECs上p-ERK、p-IκB-α和HO-1的表達(dá),進(jìn)而下調(diào)P-gp的功能和表達(dá)。結(jié)論:蒽醌類化合物T20能夠下調(diào)擬缺血損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞上TNF-α表達(dá),抑制rBMECs上的MAPK/ERK和NF-κB的激活,進(jìn)而下調(diào)HO-1的表達(dá)以調(diào)控P-gp的功能和表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：P-gp TNF-α MAPK/ERK NF-κB HO-1
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 前言11-13
• 第一部分 蒽醌類化合物T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp的影響13-29
• 1 引言13
• 2 實(shí)驗(yàn)材料13-18
• 2.1 試劑與溶液13-17
• 2.2 主要儀器17-18
• 3 實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 3.1 rBMECs、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)18
• 3.1.1 rBMECs的分離與培養(yǎng)18
• 3.1.2 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)18
• 3.2 rBMECs-神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立18
• 3.3 蒽醌類化合物T20對rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響18-19
• 3.4 蒽醌類化合物T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp功能的影響19-20
• 3.5 蒽醌類化合物T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp表達(dá)的影響20-22
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22
• 4 結(jié)果22-26
• 4.1 rBMECs-神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立22-23
• 4.2 蒽醌類化合物T20對rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響23
• 4.3 蒽醌類化合物T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp功能的影響23-25
• 4.4 蒽醌類化合物T20對正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp表達(dá)的影響25-26
• 5 討論26-28
• 6 小結(jié)28-29
• 第二部分 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的影響29-43
• 1 引言29
• 2 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 2.1 試劑及主要溶液的配制29
• 2.2 主要儀器29-30
• 3 試驗(yàn)方法30-33
• 3.1 建立Na_2S_2O_4損傷神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的擬缺血損傷模型30-31
• 3.1.1 Na_2S_2O_4對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響30
• 3.1.2 擬缺血損傷后rBMECs上P-gp功能變化30-31
• 3.1.3 擬缺血損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥因子的變化31
• 3.2 阿司匹林對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響31
• 3.3 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp功能的影響31-32
• 3.4 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp表達(dá)的影響32
• 3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 4 結(jié)果33-40
• 4.1 建立Na_2S_2O_4損傷神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的擬缺血損傷模型33-36
• 4.1.1 Na_2S_2O_4對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響33
• 4.1.2 不同濃度的 Na_2S_2O_4 對 rBMECs-神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系 TEER 值的影響33-34
• 4.1.3 擬缺血損傷后 rBMECs 上 P-gp 功能的變化34-36
• 4.1.4 擬缺血損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥因子的變化36
• 4.2 阿司匹林對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響36-37
• 4.3 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp功能的影響37-39
• 4.4 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp表達(dá)的影響39-40
• 5 討論40-42
• 6 小結(jié)42-43
• 第三部分 蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp影響的機(jī)制研究43-61
• 1 引言43
• 2 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 2.1 試劑及主要溶液的配制43
• 2.2 主要儀器43-44
• 3 試驗(yàn)方法44-47
• 3.1 PD、PDTC和ZnPP對rBMECs增殖的影響44
• 3.2 PD、PDTC和ZnPP對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp功能的影響44-45
• 3.3 相關(guān)因子表達(dá)的測定45-46
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46-47
• 4 結(jié)果47-57
• 4.1 PD、PDTC和ZnPP對rBMECs增殖的影響47-48
• 4.2 阿司匹林對擬缺血性損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及rBMECs上相關(guān)因子的影響48-50
• 4.3 PD、PDTC和ZnPP對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp功能的影響50-54
• 4.4 PD、PDTC和ZnPP對擬缺血損傷后rBMECs相關(guān)因子的影響54-57
• 5 討論57-60
• 6 小結(jié)60-61
• 第四部分 文獻(xiàn)綜述 炎癥反應(yīng)與腦中風(fēng)61-67
• 參考文獻(xiàn)67-76
• 附錄76-78
• 致謝78-79

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  本文關(guān)鍵詞：蒽醌類化合物T20對擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：281101