本文關(guān)鍵詞：P-糖蛋白抑制劑篩選模型的構(gòu)建及其在化合物評價中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)是一種重要的外排轉(zhuǎn)運體,在藥物的吸收、分布、代謝和排泄的過程中起到重要的作用,也是腫瘤多藥耐藥產(chǎn)生的原因之一。P-gp抑制劑的篩選及其介導(dǎo)的藥物轉(zhuǎn)運研究在新藥研發(fā)中受到越來越多的關(guān)注。本文中,我們首先構(gòu)建了caco-2細胞單層轉(zhuǎn)運模型,并從跨膜電阻的測定和顯微結(jié)構(gòu)的觀察兩個方面對細胞單層的完整性進行了驗證。其次,我們構(gòu)建了小鼠小腸3D類器官研究P-gp的模型,從mRNA水平和蛋白水平對3D類器官與小鼠小腸中P-gp的表達進行了比較。在此模型的基礎(chǔ)上,我們創(chuàng)造性地使用超聲波細胞破碎儀和多功能酶標(biāo)儀分別對樣品進行處理與檢測,建立了一種更加快速、高效的P-gp抑制劑篩選的方法。再次,我們在體內(nèi)實驗中選擇茚地那韋作為P-gp的底物,通過茚地那韋藥代動力學(xué)行為的變化來評價化合物對P-gp的作用�；谏鲜鯬-gp抑制劑體外體內(nèi)篩選模型,我們評價了一些中草藥單體和小分子化合物對P-gp的抑制作用。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),中藥單體葫蘆素E可以顯著抑制地高辛(P-gp的底物)跨caco-2細胞單層的外排,并明顯減少羅丹明123(P-gp的底物)在3D類器官中的累積。在大鼠體內(nèi)單次給藥實驗中,葫蘆素E顯著增加茚地那韋的達峰濃度(Cmax)和藥時曲線下面積(AUC0-t),降低表觀分布容積(Vd)和血漿清除率(CL),增加了茚地那韋的吸收,減少了外排。因此,..葫蘆素E在體外體內(nèi)均抑制了P-gp的活性。此外,小分子化合物L(fēng)N-505和WG-491抑制地高辛跨caco-2細胞單層的外排,但對茚地那韋的體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)沒有顯著的影響,表明這兩種化合物對P-gp的抑制作用在體外體內(nèi)存在差異�？傊�,本文所建立的P-gp抑制劑篩選模型可以對化合物進行體外和體內(nèi)的綜合評價,為P-gp介導(dǎo)的藥物轉(zhuǎn)運研究提供了強有力的工具。
【關(guān)鍵詞】：Caco-2細胞 3D類器官 P-糖蛋白 茚地那韋 LC-MS/MS
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-13
• 第一章 緒論13-32
• 1.1 藥物轉(zhuǎn)運體13-17
• 1.1.1 可溶性物質(zhì)載體轉(zhuǎn)運體13
• 1.1.2 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體13-17
• 1.2 P-糖蛋白17-24
• 1.2.1 P-糖蛋白概述17-18
• 1.2.2 P-糖蛋白的分布及生理作用18-21
• 1.2.3 P-糖蛋白的底物21-22
• 1.2.4 P-糖蛋白的抑制劑22-24
• 1.3 P-糖蛋白抑制劑在新藥研發(fā)中的作用24-26
• 1.3.1 P-糖蛋白抑制劑與生物利用度24-25
• 1.3.2 P-糖蛋白抑制劑與腫瘤25-26
• 1.4 P-糖蛋白抑制劑的篩選模型26-30
• 1.4.1 以膜為基礎(chǔ)的模型26-28
• 1.4.2 以細胞為基礎(chǔ)的模型28-30
• 1.5 本課題的意義及創(chuàng)新之處30-32
• 第二章 Caco-2細胞單層模型的構(gòu)建及驗證32-48
• 2.1 前言32-33
• 2.2 實驗材料33-35
• 2.2.1 細胞株33
• 2.2.2 主要實驗試劑及耗材33-34
• 2.2.3 主要實驗儀器34-35
• 2.2.4 主要試劑的配制35
• 2.3 實驗方法35-42
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)35-36
• 2.3.2 Caco-2細胞單層模型的建立及驗證36-40
• 2.3.3 測定地高辛的LC-MS/MS分析方法的建立40-42
• 2.4 實驗結(jié)果與分析42-48
• 2.4.1 跨膜電阻(TEER)的測定42-43
• 2.4.2 Caco-2細胞的顯微結(jié)構(gòu)43-44
• 2.4.3 地高辛的分析方法學(xué)確證44-48
• 第三章 小鼠小腸3D類器官模型的構(gòu)建及驗證48-61
• 3.1 前言48-49
• 3.2 實驗材料49-52
• 3.2.1 實驗動物49
• 3.2.2 主要實驗試劑及耗材49-50
• 3.2.3 主要實驗儀器50-51
• 3.2.4 主要試劑的配制51-52
• 3.3 實驗方法52-58
• 3.3.1 隱窩的分選及3D類器官的培養(yǎng)52-53
• 3.3.2 3D類器官模型的驗證53-57
• 3.3.3 3D類器官的處理及羅丹明123檢測方法的建立57-58
• 3.4 實驗結(jié)果與分析58-61
• 3.4.1 3D類器官模型的驗證58-59
• 3.4.2 羅丹明123的標(biāo)準(zhǔn)曲線59-61
• 第四章 P-糖蛋白抑制劑篩選模型在化合物評價中的應(yīng)用61-89
• 4.1 前言61-62
• 4.2 實驗材料62-65
• 4.2.1 實驗動物62
• 4.2.2 主要實驗試劑及耗材62-63
• 4.2.3 主要實驗儀器63-64
• 4.2.4 主要試劑的配制64-65
• 4.3 實驗方法65-74
• 4.3.1 地高辛跨caco-2細胞單層的轉(zhuǎn)運65-66
• 4.3.2 Caco-2細胞中P-糖蛋白表達的檢測66-69
• 4.3.3 羅丹明123跨3D類器官的轉(zhuǎn)運69-70
• 4.3.4 測定茚地那韋的LC-MS/MS分析方法的建立70-72
• 4.3.5 茚地那韋的藥代動力學(xué)研究72-74
• 4.4 實驗結(jié)果與分析74-89
• 4.4.1 不同化合物對地高辛轉(zhuǎn)運的影響74-75
• 4.4.2 葫蘆素E對地高辛轉(zhuǎn)運的影響75-76
• 4.4.3 葫蘆素E對P-gp表達的影響76-77
• 4.4.4 葫蘆素E對羅丹明123轉(zhuǎn)運的影響77-78
• 4.4.5 茚地那韋的分析方法學(xué)確證78-81
• 4.4.6 葫蘆素E對茚地那韋藥代動力學(xué)的影響81-85
• 4.4.7 化合物L(fēng)N-505對茚地那韋藥代動力學(xué)的影響85-87
• 4.4.8 化合物WG-491對茚地那韋藥代動力學(xué)的影響87-89
• 第五章 討論89-95
• 第六章 結(jié)論95-96
• 參考文獻96-109
• 附錄Ⅰ 縮略詞及中英文對照表109-111
• 附錄Ⅱ 碩士期間科研成果111-112
• 致謝112-113

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