本文關鍵詞：基于胚胎—腫瘤映射的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選及藥理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胚胎早期發(fā)育過程中,原腸和神經(jīng)嵴等重要組織的分化由上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)變(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)機制驅(qū)動。惡性腫瘤具有逆胚胎轉(zhuǎn)型能力,其侵襲轉(zhuǎn)移與演進過程也依賴于EMT,以EMT為共性分子特征的胚胎-腫瘤映射現(xiàn)象可被用于抗腫瘤藥物的篩選。通過斑馬魚早期胚胎發(fā)育映射腫瘤轉(zhuǎn)移的體內(nèi)過程,可更有效地篩選抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物。Twist1蛋白是調(diào)控正常胚胎與腫瘤發(fā)生EMT的重要和始動性轉(zhuǎn)錄因子,在惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和演進過程中具有重要作用。本課題構(gòu)建了Twist1啟動子的綠色熒光報告基因改造斑馬魚模型,通過觀察熒光強度和組織定位變化來映射腫瘤EMT,建立篩選體系并對五十種合成化合物和中藥單體進行了高通量篩選,尋找潛在的抗腫瘤增殖侵襲轉(zhuǎn)移的EMT抑制劑。在此基礎上,對候選化合物進行“4×4”Dual-luciferase報告基因檢測系統(tǒng)及高內(nèi)涵檢測系統(tǒng)驗證了篩選得到的效果最好的三種合成化合物和中藥單體:多西環(huán)素、小白菊內(nèi)酯和芹菜素。利用細胞功能實驗、高內(nèi)涵表型分析、Westernbloting、表達譜芯片、LC-MS/MS及荷瘤動物模型,分別對這三種分子進行了深入的研究。結(jié)果顯示,多西環(huán)素可在EMT轉(zhuǎn)錄層面產(chǎn)生廣泛抑制作用,產(chǎn)生抗腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用,在肺癌上具有很好的抑瘤活性和抗轉(zhuǎn)移作用;小白菊內(nèi)酯則通過Cys-AlaIle組成的共適口袋結(jié)合上游多個靶點介導的廣泛EMT轉(zhuǎn)錄因子抑制作用,產(chǎn)生抗炎抗腫瘤轉(zhuǎn)移的多重作用;芹菜素則通過NF-κB—Snail pathway直接通過抑制E-cadherin的表達抑制肝癌EMT。本研究通過構(gòu)建腫瘤-胚胎映射模型,建立了一種新型抗腫瘤藥物篩選體系和藥理研究策略,研究了三種分子的抗腫瘤作用同時也進一步證實了基于胚胎-腫瘤映射的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選體系的可行性和新藥研發(fā)意義。
【關鍵詞】：腫瘤 胚胎腫瘤映射 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)變 藥物篩選
【學位授予單位】：南開大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 引言8-13
• 第一節(jié) 研究現(xiàn)狀、成果8-11
• 第二節(jié) 研究目的、方法11-13
• 第二章 斑馬魚胚胎-腫瘤映射模型構(gòu)建及藥物篩選13-17
• 第一節(jié) Twist1-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚動物模型構(gòu)建13-15
• 第二節(jié) 藥物篩選結(jié)果及評價15-17
• 第三章 Dual-luciferase報告基因檢測系統(tǒng)構(gòu)建及結(jié)果評價17-24
• 第一節(jié) Dual-luciferase報告基因檢測系統(tǒng)構(gòu)建17-21
• 第二節(jié) 結(jié)果評價21-24
• 第四章 高內(nèi)涵檢測系統(tǒng)構(gòu)建及結(jié)果評價24-29
• 第一節(jié) 高內(nèi)涵檢測系統(tǒng)的構(gòu)建24-26
• 第二節(jié) 結(jié)果評價26-29
• 第五章 多西環(huán)素抑制肺癌EMT29-49
• 第一節(jié) 多西環(huán)素對人肺癌細胞增殖遷移侵襲能力的影響29-35
• 第二節(jié) 多西環(huán)素對人肺癌細胞EMT標志物及細胞形態(tài)的影響35-37
• 第三節(jié) 多西環(huán)素對人肺癌細胞EMT轉(zhuǎn)錄因子的影響37-41
• 第四節(jié) 多西環(huán)素動物水平的藥理研究41-47
• 第五節(jié) 討論47-49
• 第六章 小白菊內(nèi)酯抑制肺癌EMT49-66
• 第一節(jié) 小白菊內(nèi)酯對人肺癌細胞增殖遷移能力的影響49-51
• 第二節(jié) 小白菊內(nèi)酯對人肺癌細胞系分子表型的影響51-52
• 第三節(jié) 小白菊內(nèi)酯影響人肺癌細胞EMT相關的骨架重排52-54
• 第四節(jié) 小白菊內(nèi)酯廣泛抑制了與EMT相關的細胞形態(tài)54-57
• 第五節(jié) 小白菊內(nèi)酯抑制人肺癌細胞系中EMT相關的轉(zhuǎn)錄因子57-59
• 第六節(jié) 小白菊內(nèi)酯體內(nèi)抑瘤作用59-63
• 第七節(jié) 討論63-66
• 第七章 芹菜素通過NF-κB/Snail信號通路抑制肝癌細胞EMT66-83
• 第一節(jié) 芹菜素對人肝癌細胞增殖遷移侵襲能力的影響66-69
• 第二節(jié) 芹菜素對人肝癌細胞形態(tài)及EMT標志物的影響69-73
• 第三節(jié) 芹菜素抑制人肝癌細胞NF-κB的活性和表達量73-74
• 第四節(jié) 芹菜素抑制人肝癌細胞Snail的活性和表達量74-76
• 第五節(jié) 芹菜素在荷瘤鼠中的抗癌作用76-79
• 第六節(jié) 芹菜素對于荷瘤鼠腫瘤中EMT標志物的影響79-80
• 第七節(jié) 芹菜素在體內(nèi)對NF-κB/Snail信號通路的影響80-81
• 第八節(jié) 討論81-83
• 第八章 結(jié)論83-84
• 參考文獻84-89
• 致謝89-90
• 個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果90

  本文關鍵詞：基于胚胎—腫瘤映射的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選及藥理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：272051