發(fā)布時(shí)間：2017-03-28 09:18

  本文關(guān)鍵詞：異檸檬酸裂解酶肽類抑制劑篩選及合成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：當(dāng)今,結(jié)核病(TB)依然侵害人們健康。因?yàn)槎嗨幠退?MDR)與普遍抗藥性(XDR)結(jié)核桿菌的產(chǎn)生,使結(jié)核病在世界范圍內(nèi)產(chǎn)生越來越難以治愈的現(xiàn)象。分枝桿菌持續(xù)感染和耐藥分枝桿菌的產(chǎn)生和擴(kuò)散,是當(dāng)今結(jié)核病研究應(yīng)對的兩大困難,迫切需要研發(fā)新型抗結(jié)核藥物。異檸檬酸裂解酶(isocitrate lyase, ICL)是分枝桿菌利用乙醛酸循環(huán)途徑中得到能量的一個(gè)重要限速酶,對結(jié)核桿菌維持其持留狀態(tài)起決定性作用,因此我們選擇以異檸檬酸裂解酶(ICL)作為研究新型抗結(jié)核藥物的靶點(diǎn)。通過噬菌體的肽庫篩選并合成具有抑制ICL活性的多肽。又以ICL的三維晶體結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),利用Discovery Studio 2.1中l(wèi)igentfit模塊,將篩選出的多肽與優(yōu)化后的ICL蛋白晶體進(jìn)行分子對接。用Fmoc固相的合成方法合成能夠成功對接的多肽,并進(jìn)行生物活性檢測。結(jié)果利用噬菌體肽庫的篩選得到了6條的七肽成功和ICL蛋白的晶體對接。合成后的6條七肽質(zhì)譜檢測結(jié)果均正確,6條七肽的分子量分別為917、746、848、796、658、776。利用超微量分光光度計(jì)對6條七肽進(jìn)行體外生物活性監(jiān)測,其對ICL酶的活性均明顯具有抑制的作用,抑制率分別為75%、64%、66%、77%、78%、67%。其中3條七肽抑制率超過了70%。通過Discovery Studio2.1中Binding Site Analysis模塊,對ICL晶體結(jié)構(gòu)分析,首次發(fā)現(xiàn)ICL四聚體中央部分另存在一個(gè)較大空洞,其能結(jié)合配體成為新的抑制位點(diǎn)。本研究通過虛擬篩選優(yōu)化了ICL抑制劑的篩選過程,篩選并合成ICL抑制劑,為抗結(jié)核多肽藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：異檸檬酸裂解酶 多肽 噬菌體肽庫 虛擬篩選
【學(xué)位授予單位】：長春工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R914
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 第一章 緒論6-17
• 1.1 異檸檬酸裂解酶與結(jié)核分枝桿菌6-9
• 1.1.1 異檸檬酸裂解酶基本介紹6-7
• 1.1.2 結(jié)核分枝桿菌基本介紹7-8
• 1.1.3 異檸檬酸裂解酶與結(jié)核分枝桿菌關(guān)系8-9
• 1.2 異檸檬酸裂解酶在抗結(jié)核研究中的進(jìn)展9-10
• 1.3 分子對接技術(shù)簡介10-14
• 1.3.1 分子對接10
• 1.3.2 分子對接算法的基本原理10-11
• 1.3.3 分子對接的發(fā)展方向11-14
• 1.3.4 分子對接有待解決的問題14
• 1.4 多肽固相合成法14-17
• 1.4.1 多肽固相合成14
• 1.4.2 多肽固相合成原理14-15
• 1.4.3 Fmoc固相合成法15-17
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.3 常用試劑配制19-20
• 2.4 多肽氨基酸20
• 2.5 分子對接20
• 2.6 多肽的固相合成20-21
• 2.6.1 多肽固相合成步驟20-21
• 2.6.2 多肽的分析、純化和分子量鑒定21
• 2.7 ICL蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化21-24
• 2.7.1 菌種21
• 2.7.2 菌種的培養(yǎng)及表達(dá)21-22
• 2.7.3 純化前菌體處理22
• 2.7.4 純化蛋白ICL22-23
• 2.7.5 層析柱處理23
• 2.7.6 ICL蛋白誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物及純化產(chǎn)物的鑒定23-24
• 2.8 ICL蛋白活性實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.9 檢測合成多肽對ICL的抑制效應(yīng)25-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 3.1 分子對接結(jié)果26-29
• 3.2 多肽的固相合成29-31
• 3.3 ICL蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化結(jié)果31-32
• 3.4 ICL純化蛋白的活性檢測32-33
• 3.5 合成七肽對ICL抑制作用檢測33-36
• 3.6 Di scovery Studio 2.1軟件模擬結(jié)合位點(diǎn)36-37
• 第四章 討論37-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 作者簡介46
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果46-47

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馮淑娟,齊傳民,郭雪峰;新N_3S型配位結(jié)構(gòu)的小肽分子合成及其合成方法研究[J];北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年04期

2 周逸明,陳常慶;加壓素固相合成方法的研究[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2000年02期

  本文關(guān)鍵詞：異檸檬酸裂解酶肽類抑制劑篩選及合成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：272015