本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙�；敢种苿┣乓志谹（TSA）逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的作用及初步機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的:組蛋白去乙�；敢种苿�(HDACIs)被認(rèn)為是一種具有良好前景的抗腫瘤藥物并且部分已經(jīng)進(jìn)入臨床或上市,該類藥物發(fā)揮抗腫瘤作用主要與調(diào)控腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)。其中,曲古抑菌素A(TSA)是一種經(jīng)典的HDACIs類藥物,它能夠以非競(jìng)爭(zhēng)性的、可逆的方式抑制組蛋白去乙�；�(HDACs)。有文獻(xiàn)報(bào)道,TSA能夠在多種惡性腫瘤細(xì)胞如結(jié)直腸瘤、前列腺瘤、兒童神經(jīng)母細(xì)胞瘤、皮膚瘤細(xì)胞中發(fā)揮抑制增殖和誘導(dǎo)分化的作用,且其中的機(jī)制已相對(duì)清晰;也有研究觀察到TSA能夠在前列腺惡性腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮抗侵襲、轉(zhuǎn)移的作用,但相關(guān)的進(jìn)一步研究甚少。而眾所周知,腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素。臨床數(shù)據(jù)也顯示,一些EMT相關(guān)的調(diào)控因子也與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。那么,TSA是否能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT進(jìn)而發(fā)揮抗侵襲轉(zhuǎn)移作用呢?其中可能的機(jī)制又是如何呢?本研究首先從分子水平上考察了TSA對(duì)腫瘤細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響,接著直接從功能上考察TSA對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。鑒于轉(zhuǎn)錄因子Slug對(duì)腫瘤細(xì)胞EMT具有重要的促進(jìn)作用,本研究將重點(diǎn)關(guān)注Slug,以Slug為中心來(lái)初步探討TSA逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT的機(jī)制。該研究將為HDACIs類藥物在臨床上發(fā)揮抗腫瘤作用提供了一些新的參考。研究方法:本研究主要的從EMT相關(guān)標(biāo)志物、侵襲轉(zhuǎn)移功能、EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、染色質(zhì)水平這四個(gè)層次考察TSA逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT的作用及其機(jī)制。1.采用Real Time PCR和Western Blotting技術(shù)檢測(cè)TSA對(duì)SW480、PC3細(xì)胞中E-cadherin、Vimentin m RNA和蛋白表達(dá)的影響,再用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)TSA對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞膜上E-cadherin表達(dá)的影響。2.采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TSA對(duì)SW480、PC3細(xì)胞增殖的影響,確定對(duì)兩種細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響的TSA濃度和處理時(shí)間點(diǎn);再用Transwell侵襲和轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)考察TSA對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。3.利用Real Time PCR和Western Blotting技術(shù)檢測(cè)TSA對(duì)SW480、PC3細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子Slug m RNA和蛋白表達(dá)的影響,再用Western Blotting檢測(cè)TSA處理后Slug、E-cadherin蛋白表達(dá)隨時(shí)間點(diǎn)的變化情況。最后將Slug質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SW480和PC3細(xì)胞中,同時(shí)在轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上用TSA處理或不處理后,檢測(cè)細(xì)胞中Slug、E-cadherin和Vimentinm RNA和蛋白表達(dá)的變化。4.采用CHIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC4與Slug基因啟動(dòng)子的結(jié)合情況。研究結(jié)果:1.在SW480和PC3兩種腫瘤細(xì)胞中,TSA能夠在m RNA水平和蛋白水平上調(diào)上皮性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá),而下調(diào)間質(zhì)性標(biāo)志物Vimentin的表達(dá);另外,激光共聚焦檢測(cè)能夠直觀的觀察到TSA上調(diào)SW480和PC3細(xì)胞膜上的E-cadherin表達(dá)。2.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到,在48 h內(nèi),100 n M的TSA對(duì)SW480和PC3細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響;在Transwell侵襲和轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中,100 n M的TSA處理兩種細(xì)胞48 h后能夠明顯減少其侵襲、轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞數(shù)。3.在SW480和PC3兩種腫瘤細(xì)胞中,TSA能夠在m RNA水平和蛋白水平下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Slug的表達(dá);且TSA處理腫瘤細(xì)胞后,Slug蛋白表達(dá)明顯降低的時(shí)間點(diǎn)先于E-cadherin蛋白表達(dá)明顯增加的時(shí)間點(diǎn);過(guò)表達(dá)Slug質(zhì)粒能夠在m RNA水平和蛋白水平引起E-cadherin的下調(diào)和Vimentin的上調(diào),而在過(guò)表達(dá)Slug質(zhì)粒的基礎(chǔ)上用TSA處理則能夠逆轉(zhuǎn)這種作用。4.經(jīng)TSA處理后,SW480和PC3細(xì)胞中HDAC1和HDAC2與Slug基因啟動(dòng)子結(jié)合增加,而HDAC1和HDAC2在細(xì)胞內(nèi)的總表達(dá)量無(wú)變化。研究結(jié)論及意義:1.TSA能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT且能減弱腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,該研究首次確認(rèn)了組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT的作用。2.TSA能夠下調(diào)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Slug的表達(dá)且能通過(guò)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子Slug下調(diào)而逆轉(zhuǎn)EMT。該研究初步探討了其中可能的機(jī)制,為HDACIs的臨床應(yīng)用提供了一個(gè)參考。3.組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA能夠引起HDAC1和HDAC2在Slug基因啟動(dòng)子上結(jié)合增多。提示了一種新的現(xiàn)象:HDACIs可能引起HDACs在某些特定基因的啟動(dòng)子上結(jié)合增加,從而抑制這些基因的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白去乙�；敢种苿� 曲古抑菌素A 上皮細(xì)胞間質(zhì)化
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 縮略詞表9-10
• 1 緒論10-16
• 1.1 組蛋白去乙�；敢种苿�10-11
• 1.2 曲古抑菌素A（TSA）的抗腫瘤作用11-12
• 1.3 EMT與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移12-13
• 1.4 EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子13-14
• 1.5 本研究的意義及創(chuàng)新性14-15
• 1.6 研究的主要技術(shù)路線15-16
• 2 曲古抑菌素A（TSA）逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT的作用16-32
• 2.1 材料及儀器16-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-30
• 2.4 討論與小結(jié)30-32
• 3 曲古抑菌素A（TSA）逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT機(jī)制的初步研究32-43
• 3.1 材料及儀器32-34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-41
• 3.4 討論與小結(jié)41-43
• 4 結(jié)論與展望43-45
• 4.1 結(jié)論43-44
• 4.2 展望44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 附錄50

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙�；敢种苿┣乓志谹（TSA）逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的作用及初步機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：270780