本文關(guān)鍵詞：靶向乳腺癌細胞的他莫昔芬納米粒的制備及體外初步評價，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以殼聚糖(CS)為材料,合成染料木素修飾的殼聚糖衍生物(GEN-CS);以GEN-CS為載體材料,TAM為模型藥物,三聚磷酸鈉(TPP)為交凝劑,染料木素(GEN)為靶向配基,采用離子交聯(lián)法構(gòu)建靶向乳腺癌細胞的TAM納米粒,進一步評價納米粒的形態(tài)、粒徑、Zeta電勢、載藥量及包封率,體外釋放等;激光共聚焦顯微鏡觀察細胞對納米粒的攝取情況,采用MTT法比較載藥納米粒與游離藥物對MCF-7細胞的增殖抑制作用。方法:利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)催化反應(yīng),將GEN與CS通過丁二酸的雙羧基進行偶聯(lián),得到GEN-CS載體材料,運用紅外等技術(shù)對它的結(jié)構(gòu)進行確證和表征。GEN修飾的CS分子中未酰化的氨基與離子交凝劑TPP在適宜條件下形成納米粒,將TAM包載于納米粒中。用透射電子顯微鏡(TEM)觀察納米粒形態(tài);用馬爾文ZS90粒度儀測其粒徑大小和分布、電勢;HPLC法測定納米粒的載藥量和包封率;采用恒溫水浴振蕩法考察納米粒的體外釋藥。制備FITC標(biāo)記的他莫昔芬殼聚糖納米粒(TAM-CS-NPs)和TAM-GEN-CS-NPs,然后分別作用于MCF-7細胞,用激光共聚焦顯微鏡觀察TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs在細胞內(nèi)的攝入與分布。體外培養(yǎng)MCF-7細胞,通過MTT法測定染料木素修飾的殼聚糖納米粒(GEN-CS-NPs)、TAM溶液、TAM-GEN-CS-NPs納米粒懸液對細胞的增殖抑制率,并計算當(dāng)細胞生長抑制率為50%時的所需藥物濃度,即IC50值。結(jié)果:制備的GEN-CS載體材料中GEN基團的質(zhì)量百分含量為1.16%,GEN-CS和CS紅外譜圖對比發(fā)現(xiàn),新增的1600 cm-1、1456 cm-1為苯環(huán)的特征吸收峰,1668 cm-1為酰胺I帶,這證實CS上成功接枝GEN。透射電子顯微鏡(TEM)觀察納米粒為圓形或類圓形,平均粒徑為299.8 nm,PDI為0.181,Zeta電位為27.6 m V,載藥量為14.02,包封率為85.77%,與TAM相比較,TAM-GEN-CS-NPs具有明顯的緩釋性能。MCF-7細胞與經(jīng)FITC標(biāo)記的TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs,共同孵育4 h(37℃),激光共聚焦顯微鏡觀察證明腫瘤細胞對TAM-GEN-CS-NPs的攝取明顯高于CS-NPs。經(jīng)析因設(shè)計資料的方差分析,顯示藥物因素與濃度因素之間存在交互效應(yīng)(F=31.04,P=0.000),即不同處理組對腫瘤細胞的細胞增殖抑制率隨藥物濃度的變化而變化。GEN-CS-NPs對MCF-7細胞有輕微的增殖抑制作用,且隨著濃度的增加,抑制作用增強且具有顯著性差異(P0.05)。TAM、TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞均有抑制作用,且隨著濃度的升高而增強;相同藥物的濃度,作用相同的時間,TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞增殖抑制作用最強,GEN-CS-NPs最弱,具有顯著性差異(P0.05)。TAM、TAM-GEN-CS-NPs的IC50分別為18.21μmol/L、12.82μmol/L。結(jié)論:以GEN-CS為載體,采用離子交聯(lián)法制備的TAM-GEN-CS-NPs形狀為類圓形或圓形、粒度分布均勻、具有較高載藥量和較好緩釋性能;激光共聚焦觀察結(jié)果初步顯示,TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞具有靶向性;MTT結(jié)果顯示TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞增殖抑制作用強,故TAM-GEN-CS-NPs有望成為一種潛在的乳腺癌靶向性藥物載體。
【關(guān)鍵詞】：染料木素 殼聚糖 他莫昔芬 納米粒 人乳腺癌MCF-7細胞
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-15
• 第一部分 藥物含量測定方法的建立15-27
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 材料15
• 1.2 實驗方法15-19
• 2 結(jié)果19-25
• 2.1 紫外分光光度法測定GEN-CS中GEN含量19-21
• 2.2 高效液相色譜法測定TAM-GEN-CS-NPs的藥物含量21-25
• 3 討論25-26
• 3.1 紫外分光光度法測定GEN-CS中染料木素含量25
• 3.2 高效液相色譜法測定載他莫昔芬染料木素修飾殼聚糖納米粒的藥物含量25-26
• 4 結(jié)論26-27
• 4.1 紫外分光光度法測定GEN-CS中染料木素含量26
• 4.2 高效液相色譜法測定載他莫昔芬染料木素修飾殼聚糖納米粒的藥物含量26
• 4.3 載他莫昔芬染料木素修飾殼聚糖納米粒的載藥量和包封率測定方法26-27
• 第二部分 染料木素修飾的殼聚糖的合成方法Ⅰ27-41
• 1 材料與方法27-32
• 1.1 材料27
• 1.2 方法27-32
• 2 結(jié)果32-39
• 2.1 紫外分光光度法測定N-琥珀酰殼聚糖氨基取代度32-35
• 2.2 NSCS合成的影響因素考察實驗結(jié)果35-37
• 2.3 合成方法Ⅰ合成的染料木素修飾的殼聚糖37-39
• 3 討論39-40
• 3.1 氨基與茚三酮的反應(yīng)39
• 3.2 GEN-CS的合成39-40
• 4 結(jié)論40-41
• 4.1 氨基與茚三酮的反應(yīng)的最佳條件40
• 4.2 合成的GEN-CS40-41
• 第三部分 染料木素修飾的殼聚糖的合成方法Ⅱ41-53
• 1 材料與方法41-45
• 1.1 材料41
• 1.2 方法41-45
• 2 結(jié)果45-51
• 2.1 染料木素琥珀酸酯的合成45-47
• 2.2 GEN-CS的合成47-49
• 2.3 GEN-CS的紅外（IR）掃描圖譜49-51
• 3 討論51-52
• 3.1 GEN-CS的合成51-52
• 4 結(jié)論52-53
• 4.1 GEN-CS的合成52-53
• 第四部分 載他莫昔芬染料木素修飾的殼聚糖納米粒的制備及表征53-63
• 1 材料與方法53-56
• 1.1 材料53
• 1.2 方法53-56
• 2 結(jié)果56-61
• 2.1 影響TAM-GEN-CS-NPs的制備因素的考察56-58
• 2.2 TAM-GEN-CS-NPs的表征58-61
• 3 討論61-62
• 3.1 TAM-GEN-CS-NPs的制備61
• 3.2 TAM-GEN-CS-NPs體外釋藥61-62
• 4 結(jié)論62-63
• 4.1 TAM-GEN-CS-NPs的制備處方62
• 4.2 TAM-GEN-CS-NPs體外釋藥62-63
• 第五部分載他莫昔芬染料木素修飾的殼聚糖納米粒的體外初步評價63-72
• 1 材料與方法63-66
• 1.1 材料63-64
• 1.2 方法64-66
• 2 結(jié)果66-70
• 2.1 TAM-GEN-CS-NPs的細胞攝取試驗66
• 2.2 TAM-GEN-CS-NPs對乳腺癌細胞的增值抑制率試驗66-70
• 3 討論70-71
• 3.1 TAM-GEN-CS-NPs的細胞攝取試驗70
• 3.2 TAM-GEN-CS-NPs對乳腺癌細胞的增值抑制率試驗70-71
• 4 結(jié)論71-72
• 4.1 TAM-GEN-CS-NPs的細胞攝取71
• 4.2 TAM-GEN-CS-NPs對乳腺癌細胞的增值抑制率試驗71-72
• 參考文獻72-75
• 綜述75-86
• 參考文獻83-86
• 致謝86-87
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果87-88
• 個人簡歷88

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 莫志強;涂剛;羅浩軍;李振華;楊光倫;;人乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐藥細胞株的建立及鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年21期

2 陳紅麗;唐紅波;楊文智;陳漢;王銀松;梅林;張彤;熊青青;張其清;;生物素化殼聚糖修飾的PLGA納米粒的制備及表征[J];高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報;2010年08期

3 趙陽;蔣淑琴;張秀榮;;殼聚糖作為靶向制劑載體材料的研究進展[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報;2012年01期

4 馬杰;房林;;納米粒子靶向治療乳腺癌研究進展[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

5 張麗萍;丁紅;謝茵;郭曉玲;;高效液相色譜法測定枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑的含量[J];中國藥物與臨床;2009年08期

6 孫川;邢洋;胡華穎;梁云星;范博;梁桂賢;;低分子肝素pH敏感巰基殼聚糖納米粒的制備及體外黏膜透過性評價[J];中國藥學(xué)雜志;2014年16期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅浩軍;乳腺癌CAF中GPER介導(dǎo)的雌激素效應(yīng)及其在腫瘤他莫昔芬耐受中的作用探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張雅溶;透明質(zhì)酸靶向姜黃素殼聚糖納米粒的制備及初步細胞學(xué)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：靶向乳腺癌細胞的他莫昔芬納米粒的制備及體外初步評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：269764