發(fā)布時(shí)間：2017-03-27 03:11

  本文關(guān)鍵詞：表面修飾透明質(zhì)酸的PBAE納米粒攜載阿霉素逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的癌癥已成為全球首要的疾病死亡原因�；熓前┌Y治療最重要的方法之一,然而,腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性,往往導(dǎo)致化療失敗。納米載體技術(shù)的發(fā)展為克服臨床化療耐藥提供了新的研究機(jī)遇。本研究構(gòu)建了一種具有聚氨基酯(PBAE)內(nèi)核與透明質(zhì)酸(HA)外殼的納米載體系統(tǒng),用于攜載化療藥物阿霉素(DOX),以期高效逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞的耐藥性。內(nèi)容本論文的研究?jī)?nèi)容分為兩部分。第一部分包括:納米載藥體系的制備、表征,以及載藥與體外釋藥性能的考察。第二部分包括:納米載藥體系逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的體外考察(細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期考察)及其逆轉(zhuǎn)機(jī)制的初步探討。方法1.納米載藥體系的制備、表征,以及載藥與體外釋藥性能的考察:采用O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備PBAE/DOX納米核,采用熒光分光光度法考察不同PBAE/DOX投料比下DOX的載藥量與包封率,評(píng)價(jià)PBAE納米核對(duì)DOX的攜載能力;利用紅外(IR)和熒光光譜分析PBAE/DOX中PBAE和DOX分子間的相互作用,并利用透射電鏡和電位-粒徑儀對(duì)其形貌、粒徑及其分布進(jìn)行表征;采用共孵育的方法,通過正負(fù)電荷間的相互作用實(shí)現(xiàn)HA對(duì)PBAE/DOX的表面修飾,制備納米載藥體系HA/PBAE/DOX,探討不同投料比對(duì)其粒徑與Zeta電位的影響,并檢測(cè)HA/PBAE/DOX的形貌、粒徑與表面荷電性質(zhì);采用動(dòng)態(tài)透析法考察PBAE/DOX與HA/PBAE/DOX在不同p H值釋放介質(zhì)中的體外釋藥特征。2.HA/PBAE/DOX對(duì)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)考察:利用CCK-8試劑盒檢測(cè)游離DOX、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX對(duì)正常乳腺癌細(xì)胞株MCF-7與耐藥乳腺癌細(xì)胞株MCF-7/ADR的細(xì)胞毒性,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50);通過流式細(xì)胞術(shù)分析游離DOX、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用以及對(duì)細(xì)胞周期的影響,綜合評(píng)價(jià)HA/PBAE/DOX對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。3.耐藥性的逆轉(zhuǎn)機(jī)制探討:采用流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)HA/PBAE/DOX在MCF-7/ADR細(xì)胞中的蓄積情況及分布;通過競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)考察游離HA對(duì)HA/PBAE/DOX入胞的影響,初步探討HA/PBAE/DOX對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)機(jī)制。結(jié)果1.成功構(gòu)建納米載藥體系HA/PBAE/DOX,呈規(guī)則球狀形態(tài),具有經(jīng)典的核-殼結(jié)構(gòu);當(dāng)HA/PBAE/DOX投料質(zhì)量比為15/10/3時(shí),納米載藥體系的平均粒徑為185.0 nm,Zeta電位為-29.3 m V;DOX通過疏水作用力和氫鍵作用高效包載于PBAE納米核,DOX載藥量約為7.5%。2.體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著釋放介質(zhì)pH的降低,納米載藥體系PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX中DOX的釋放速率逐漸增加,呈現(xiàn)顯著的pH-敏感藥物釋放特性。3.在耐藥乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞中,PBAE/DOX與HA/PBAE/DOX均表現(xiàn)出顯著強(qiáng)于游離DOX的細(xì)胞毒性;相比于PBAE/DOX,HA/PBAE/DOX對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞表現(xiàn)出一定的選擇性,能顯著誘導(dǎo)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡,并阻滯細(xì)胞周期于S期(DNA合成期),說明HA/PBAE/DOX具有逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的作用。4.HA/PBAE/DOX能夠高效攜載DOX進(jìn)入耐藥乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞,并且其入胞作用能被游離HA顯著抑制,說明HA/PBAE/DOX可以通過黏附因子CD44介導(dǎo)的胞吞途徑進(jìn)入MCF-7/ADR細(xì)胞,從而逃逸細(xì)胞表面過表達(dá)的P-糖蛋白(P-gp)的外排作用,逆轉(zhuǎn)細(xì)胞耐藥。結(jié)論本研究成功制備了納米載藥體系HA/PBAE/DOX,具有經(jīng)典的核-殼結(jié)構(gòu),呈現(xiàn)明顯的p H-敏感藥物釋放特性;能夠顯著逆轉(zhuǎn)乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞的耐藥性,逆轉(zhuǎn)機(jī)制與其通過CD44介導(dǎo)的胞吞途徑入胞,逃逸P-gp的外排作用相關(guān)。因此,該納米載藥體系有望用于臨床耐藥乳腺癌的治療。
【關(guān)鍵詞】：透明質(zhì)酸 PBAE納米 阿霉素 腫瘤耐藥
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX納米粒的制備及表征15-25
• 1.1 對(duì)象和方法15-17
• 1.1.1 材料與儀器15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.2 結(jié)果17-22
• 1.2.1 PBAE/DOX與HA/PBAE/DOX納米粒的制備17-18
• 1.2.2 PBAE/DOX納米粒的表征以及PBAE與DOX分子間作用力的探討18-20
• 1.2.3 HA/PBAE/DOX納米粒的表征20-21
• 1.2.4 PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX納米粒的體外藥物釋放性質(zhì)考察21-22
• 1.3 討論22-24
• 1.3.1 PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX納米粒的制備22-23
• 1.3.2 PBAE/DOX 納米粒的表征，以及 PBAE 與 DOX 分子間的相互作用力23
• 1.3.3 PBAE/DOX 與 HA/PBAE/DOX 納米粒的體外釋藥性質(zhì)23-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 二、載藥 HA/PBAE/DOX 納米粒逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥性的體外考察及其逆轉(zhuǎn)機(jī)制的初步探討25-40
• 2.1 對(duì)象和方法25-29
• 2.1.1 材料與儀器25
• 2.1.2 細(xì)胞基本培養(yǎng)技術(shù)25-26
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法26-29
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29
• 2.2 結(jié)果29-36
• 2.2.1 P-gp在乳腺癌MCF-7 和MCF-7/ADR細(xì)胞中的表達(dá)29
• 2.2.2 CD44在MCF-7 和MCF-7/ADR細(xì)胞中的表達(dá)29-30
• 2.2.3 HA/PBAE/DOX納米粒逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的作用評(píng)價(jià)30-31
• 2.2.4 HA/PBAE/DOX納米粒對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡和周期的影響31-33
• 2.2.5 HA/PBAE/DOX納米粒進(jìn)入MCF-7/ADR細(xì)胞的機(jī)制探討33-34
• 2.2.6 HA/PBAE/DOX納米粒入胞機(jī)制34-36
• 2.3 討論36-39
• 2.3.1 P-gp與CD44在MCF-7 和MCF-7/ADR細(xì)胞中的表達(dá)36
• 2.3.2 HA/PBAE/DOX納米粒的體外細(xì)胞毒性36-37
• 2.3.3 HA/PBAE/DOX納米粒對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡和周期的影響37-38
• 2.3.4 HA/PBAE/DOX納米粒進(jìn)入MCF-7/ADR細(xì)胞的入胞機(jī)制探討38
• 2.3.5 HA/PBAE/DOX納米粒逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥性的機(jī)制38-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 用于癌癥治療的基于透明質(zhì)酸的載藥體系的研究進(jìn)展47-69
• 綜述參考文獻(xiàn)62-69
• 致謝69-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷70

  本文關(guān)鍵詞：表面修飾透明質(zhì)酸的PBAE納米粒攜載阿霉素逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：269785