本文關(guān)鍵詞：選擇性COX-2抑制劑替泊沙林在大鼠脊髓膠質(zhì)細(xì)胞激活和神經(jīng)病理性疼痛中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的大量的研究表明神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可以誘導(dǎo)神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的發(fā)生和維持。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在靜息狀態(tài)下幾乎不表達(dá)或僅少量表達(dá)COX-2,但在細(xì)胞因子和脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)等致炎物質(zhì)刺激下,小膠質(zhì)細(xì)胞中的COX-2m RNA與蛋白表達(dá)水平迅速升高,同時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞被激活發(fā)生形態(tài)學(xué)變化,并釋放腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6和NO等神經(jīng)毒性物質(zhì),損傷神經(jīng)元。星形膠質(zhì)細(xì)胞中COX-1的表達(dá)基本不變,而COX-2的表達(dá)增加。這說明COX-2和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)中起重要作用。但有關(guān)COX-2抑制劑對神經(jīng)痛中膠質(zhì)細(xì)胞的激活及對疼痛行為的影響,相關(guān)報(bào)道尚很少。本研究擬用脊神經(jīng)高位結(jié)扎(Spinal Nerve Ligation,SNL)神經(jīng)痛模型大鼠,運(yùn)用行為學(xué)測定方法和免疫熒光染色技術(shù)檢測COX-2抑制劑替泊沙林對疼痛行為的影響及對小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。評估選擇性COX-2抑制劑替泊沙林在脊神經(jīng)結(jié)扎模型大鼠中對脊髓膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用。方法實(shí)驗(yàn)一:制作SNL神經(jīng)痛模型大鼠,測量大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎后3-21天的機(jī)械縮足閾值,評估大鼠機(jī)械性疼痛行為隨時(shí)間變化規(guī)律。雄性SD大鼠20只,隨機(jī)分為兩組,假手術(shù)組和手術(shù)組。用von Frey Filament連續(xù)測定大鼠疼痛閾值的經(jīng)時(shí)變化過程,以50%縮足閾值表示,繪制機(jī)械痛閾值經(jīng)時(shí)變化曲線。實(shí)驗(yàn)二:單次灌服替泊沙林后大鼠機(jī)械縮足閾值變化。健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠40只,L5脊神經(jīng)結(jié)扎手術(shù)后隨機(jī)分為5組,分組情況為:(1)CMC組:0.5%羧甲基纖維素鈉(20ml/kg),為陰性對照組;(2)雙氯芬酸鈉組:2.58mg/kg的雙氯芬酸鈉,為陽性對照組;(3)替泊沙林低、中、高劑量組(0.78mg/kg、1.56mg/kg及3.12mg/kg),為試藥組。術(shù)后第4天單次灌服給藥,用von Frey Filament測定給藥1小時(shí)后大鼠機(jī)械痛閾值變化情況。實(shí)驗(yàn)三:替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛早期大鼠機(jī)械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。選取健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠18只,L5脊神經(jīng)結(jié)扎手術(shù)后隨機(jī)分為3組,分組情況為(1)CMC組:0.5%羧甲基纖維素鈉(20ml/kg),為陰性對照組;(2)雙氯芬酸鈉組:2.58mg/kg的雙氯芬酸鈉,為陽性對照組;(3)替泊沙林組:3.12mg/kg替泊沙林。SNL術(shù)前1h灌服給藥,每天一次,持續(xù)至術(shù)后第7天,于手術(shù)后第3天至第7天進(jìn)行機(jī)械痛閾值測定,并用免疫熒光法檢測脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞激活情況。實(shí)驗(yàn)四:替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛后期大鼠機(jī)械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。選取健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠18只,分組情況同實(shí)驗(yàn)三。在脊神經(jīng)結(jié)扎15天后開始連續(xù)灌服給藥,每天一次,持續(xù)至術(shù)后第20天,于手術(shù)后第15天至第20天進(jìn)行機(jī)械痛閾值測定,并用免疫熒光法檢測神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活情況。結(jié)果1.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后機(jī)械性疼痛閾值經(jīng)時(shí)變化曲線SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后第3天疼痛閾值開始降低,此后一直波動(dòng)于5g左右。術(shù)后第16天開始,疼痛閾值逐漸上升,直至術(shù)后第21天,但和假手術(shù)組相比,術(shù)側(cè)縮足閾值仍顯著降低(P0.05),術(shù)后第3天到第15天,疼痛閾值維持一個(gè)較穩(wěn)定水平(P0.01)。2.單次灌服替泊沙林后機(jī)械縮足閾值變化灌服替泊沙林顯著提高大鼠機(jī)械縮足閾值。CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林0.78、1.56、3.12mg/kg組的機(jī)械縮足閾值給藥前分別是4.07±1.69g、4.01±0.26g、3.91±0.77g、3.97±1.2g、4.15±1.06g,給藥1小時(shí)后分別為4.25±1.05g、10.85±1.86g、6.2±0.77g、8.08±1.47g、11.15±1.02g。替泊沙林高劑量組和CMC對照組對比機(jī)械痛閾值明顯增加(P0.01),且替泊沙林中、高劑量組和替泊沙林低劑量組對比機(jī)械痛閾值顯著增加(分別為P0.05和P0.01);替泊沙林高劑量組和雙氯芬酸鈉組對比無顯著性差異(P0.05)。3.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎前后連續(xù)灌服替泊沙林7天對大鼠機(jī)械縮足閾值變化及對GFAP和OX-42的表達(dá)的影響術(shù)前1h開始第一次給藥,術(shù)后第1-7天連續(xù)灌服給藥,結(jié)果表明替泊沙林能夠抑制機(jī)械性疼痛的發(fā)展,SNL脊神經(jīng)結(jié)扎第3天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為3.12±1.76g、10.85±1.52g、10.42±2.47g,第5天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為3.66±0.26g、11.63±0.66g、12.87±0.51g,第7天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為3.33±0.73g、12.67±0.29g、12.74±0.65g.由此可知,連續(xù)灌服替泊沙林在第3天、第5天、第7天均能有效抑制機(jī)械痛閾值(P0.01),和雙氯芬酸鈉相比,無顯著性差異。免疫熒光染色結(jié)果顯示,脊神經(jīng)結(jié)扎可以誘導(dǎo)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活,且這種激活可以被術(shù)前預(yù)先連續(xù)灌服替泊沙林抑制。SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物OX-42免疫熒光染色強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明,與CMC對照組相比,第3天和第7天的光密度值(IOD)顯著降低(分別為P0.01和P0.05);星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物GFAP免疫熒光染色強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明,與CMC對照組相比,第3天和第7天的光密度值(IOD)顯著降低(P0.05)。4.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎15天后連續(xù)灌服替泊沙林后機(jī)械縮足閾值變化及GFAP和OX-42的表達(dá)情況脊神經(jīng)結(jié)扎15天后灌服替泊沙林能夠抑制機(jī)械性疼痛行為,但是沒有抑制脊髓神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活。SNL脊神經(jīng)結(jié)扎第15天,CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為5.57±1.65g、11.4±1.77g、10.06±1.5g,第17天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為6.91±1.82g、10.9±1.9g、11.38±0.96g,第20天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機(jī)械縮足閾值分別為7.9±0.7g、11.66±0.61g、11.84±0.84g。脊神經(jīng)結(jié)扎20天后免疫熒光染色結(jié)果顯示,和CMC對照組相比,OX-42標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞和GFAP標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞并沒有顯著變化。提示替泊沙林并沒有抑制神經(jīng)病理性疼痛后期脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活。結(jié)論1.選擇性COX-2抑制劑替泊沙林可劑量依賴性地抑制由大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎所引起的機(jī)械性疼痛行為;2.脊髓COX-2介導(dǎo)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活在神經(jīng)病理性疼痛的早期起著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)氧化酶-2 神經(jīng)病理性疼痛 選擇性COX-2抑制劑 小膠質(zhì)細(xì)胞 星形膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 中英文對照縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 1 材料和方法17-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.2 藥品及試劑17
• 1.3 主要儀器17-18
• 1.4 主要試劑配制18-19
• 2 試驗(yàn)方法19-22
• 2.1 制作大鼠神經(jīng)痛模型19
• 2.2 大鼠機(jī)械性疼痛行為測試19-20
• 2.3 大鼠灌流取材20
• 2.4 組織包埋20-21
• 2.5 冰凍切片21
• 2.6 免疫熒光染色21
• 2.7 熒光染色分析21-22
• 3 給藥方案22-24
• 3.1 單次灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的作用22
• 3.2 SNL脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)前后連續(xù)灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響22
• 3.3 替泊沙林對神經(jīng)痛后期大鼠機(jī)械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響22-24
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24-25
• 5 結(jié)果25-35
• 5.1 大鼠手術(shù)前后疼痛行為經(jīng)時(shí)變化過程25
• 5.2 單次灌服替泊沙林后機(jī)械縮足閾值變化25-26
• 5.3 SNL脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)前后連續(xù)灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響26-31
• 5.4 替泊沙林對神經(jīng)痛后期大鼠機(jī)械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響31-35
• 6 討論35-39
• 7 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 附圖 161-62
• 致謝62

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