本文關(guān)鍵詞：選擇性COX-2抑制劑替泊沙林在大鼠脊髓膠質(zhì)細胞激活和神經(jīng)病理性疼痛中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的大量的研究表明神經(jīng)膠質(zhì)細胞可以誘導神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的發(fā)生和維持。神經(jīng)膠質(zhì)細胞在靜息狀態(tài)下幾乎不表達或僅少量表達COX-2,但在細胞因子和脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)等致炎物質(zhì)刺激下,小膠質(zhì)細胞中的COX-2m RNA與蛋白表達水平迅速升高,同時小膠質(zhì)細胞被激活發(fā)生形態(tài)學變化,并釋放腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-1、白細胞介素-6和NO等神經(jīng)毒性物質(zhì),損傷神經(jīng)元。星形膠質(zhì)細胞中COX-1的表達基本不變,而COX-2的表達增加。這說明COX-2和神經(jīng)膠質(zhì)細胞在神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應中起重要作用。但有關(guān)COX-2抑制劑對神經(jīng)痛中膠質(zhì)細胞的激活及對疼痛行為的影響,相關(guān)報道尚很少。本研究擬用脊神經(jīng)高位結(jié)扎(Spinal Nerve Ligation,SNL)神經(jīng)痛模型大鼠,運用行為學測定方法和免疫熒光染色技術(shù)檢測COX-2抑制劑替泊沙林對疼痛行為的影響及對小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞激活的影響。評估選擇性COX-2抑制劑替泊沙林在脊神經(jīng)結(jié)扎模型大鼠中對脊髓膠質(zhì)細胞和神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用。方法實驗一:制作SNL神經(jīng)痛模型大鼠,測量大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎后3-21天的機械縮足閾值,評估大鼠機械性疼痛行為隨時間變化規(guī)律。雄性SD大鼠20只,隨機分為兩組,假手術(shù)組和手術(shù)組。用von Frey Filament連續(xù)測定大鼠疼痛閾值的經(jīng)時變化過程,以50%縮足閾值表示,繪制機械痛閾值經(jīng)時變化曲線。實驗二:單次灌服替泊沙林后大鼠機械縮足閾值變化。健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠40只,L5脊神經(jīng)結(jié)扎手術(shù)后隨機分為5組,分組情況為:(1)CMC組:0.5%羧甲基纖維素鈉(20ml/kg),為陰性對照組;(2)雙氯芬酸鈉組:2.58mg/kg的雙氯芬酸鈉,為陽性對照組;(3)替泊沙林低、中、高劑量組(0.78mg/kg、1.56mg/kg及3.12mg/kg),為試藥組。術(shù)后第4天單次灌服給藥,用von Frey Filament測定給藥1小時后大鼠機械痛閾值變化情況。實驗三:替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛早期大鼠機械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響。選取健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠18只,L5脊神經(jīng)結(jié)扎手術(shù)后隨機分為3組,分組情況為(1)CMC組:0.5%羧甲基纖維素鈉(20ml/kg),為陰性對照組;(2)雙氯芬酸鈉組:2.58mg/kg的雙氯芬酸鈉,為陽性對照組;(3)替泊沙林組:3.12mg/kg替泊沙林。SNL術(shù)前1h灌服給藥,每天一次,持續(xù)至術(shù)后第7天,于手術(shù)后第3天至第7天進行機械痛閾值測定,并用免疫熒光法檢測脊髓小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞激活情況。實驗四:替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛后期大鼠機械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響。選取健康無痛覺過敏痛覺遲鈍雄性SD大鼠18只,分組情況同實驗三。在脊神經(jīng)結(jié)扎15天后開始連續(xù)灌服給藥,每天一次,持續(xù)至術(shù)后第20天,于手術(shù)后第15天至第20天進行機械痛閾值測定,并用免疫熒光法檢測神經(jīng)小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活情況。結(jié)果1.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后機械性疼痛閾值經(jīng)時變化曲線SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后第3天疼痛閾值開始降低,此后一直波動于5g左右。術(shù)后第16天開始,疼痛閾值逐漸上升,直至術(shù)后第21天,但和假手術(shù)組相比,術(shù)側(cè)縮足閾值仍顯著降低(P0.05),術(shù)后第3天到第15天,疼痛閾值維持一個較穩(wěn)定水平(P0.01)。2.單次灌服替泊沙林后機械縮足閾值變化灌服替泊沙林顯著提高大鼠機械縮足閾值。CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林0.78、1.56、3.12mg/kg組的機械縮足閾值給藥前分別是4.07±1.69g、4.01±0.26g、3.91±0.77g、3.97±1.2g、4.15±1.06g,給藥1小時后分別為4.25±1.05g、10.85±1.86g、6.2±0.77g、8.08±1.47g、11.15±1.02g。替泊沙林高劑量組和CMC對照組對比機械痛閾值明顯增加(P0.01),且替泊沙林中、高劑量組和替泊沙林低劑量組對比機械痛閾值顯著增加(分別為P0.05和P0.01);替泊沙林高劑量組和雙氯芬酸鈉組對比無顯著性差異(P0.05)。3.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎前后連續(xù)灌服替泊沙林7天對大鼠機械縮足閾值變化及對GFAP和OX-42的表達的影響術(shù)前1h開始第一次給藥,術(shù)后第1-7天連續(xù)灌服給藥,結(jié)果表明替泊沙林能夠抑制機械性疼痛的發(fā)展,SNL脊神經(jīng)結(jié)扎第3天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為3.12±1.76g、10.85±1.52g、10.42±2.47g,第5天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為3.66±0.26g、11.63±0.66g、12.87±0.51g,第7天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為3.33±0.73g、12.67±0.29g、12.74±0.65g.由此可知,連續(xù)灌服替泊沙林在第3天、第5天、第7天均能有效抑制機械痛閾值(P0.01),和雙氯芬酸鈉相比,無顯著性差異。免疫熒光染色結(jié)果顯示,脊神經(jīng)結(jié)扎可以誘導脊髓小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活,且這種激活可以被術(shù)前預先連續(xù)灌服替泊沙林抑制。SNL脊神經(jīng)結(jié)扎后小膠質(zhì)細胞的標志物OX-42免疫熒光染色強度統(tǒng)計分析結(jié)果表明,與CMC對照組相比,第3天和第7天的光密度值(IOD)顯著降低(分別為P0.01和P0.05);星形膠質(zhì)細胞的標志物GFAP免疫熒光染色強度統(tǒng)計分析結(jié)果表明,與CMC對照組相比,第3天和第7天的光密度值(IOD)顯著降低(P0.05)。4.SNL脊神經(jīng)結(jié)扎15天后連續(xù)灌服替泊沙林后機械縮足閾值變化及GFAP和OX-42的表達情況脊神經(jīng)結(jié)扎15天后灌服替泊沙林能夠抑制機械性疼痛行為,但是沒有抑制脊髓神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活。SNL脊神經(jīng)結(jié)扎第15天,CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為5.57±1.65g、11.4±1.77g、10.06±1.5g,第17天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為6.91±1.82g、10.9±1.9g、11.38±0.96g,第20天CMC對照組、雙氯芬酸鈉組和替泊沙林(3.12mg/kg)組機械縮足閾值分別為7.9±0.7g、11.66±0.61g、11.84±0.84g。脊神經(jīng)結(jié)扎20天后免疫熒光染色結(jié)果顯示,和CMC對照組相比,OX-42標記的小膠質(zhì)細胞和GFAP標記的星形膠質(zhì)細胞并沒有顯著變化。提示替泊沙林并沒有抑制神經(jīng)病理性疼痛后期脊髓小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活。結(jié)論1.選擇性COX-2抑制劑替泊沙林可劑量依賴性地抑制由大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎所引起的機械性疼痛行為;2.脊髓COX-2介導的神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活在神經(jīng)病理性疼痛的早期起著重要作用。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)氧化酶-2 神經(jīng)病理性疼痛 選擇性COX-2抑制劑 小膠質(zhì)細胞 星形膠質(zhì)細胞
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 中英文對照縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 1 材料和方法17-19
• 1.1 實驗動物17
• 1.2 藥品及試劑17
• 1.3 主要儀器17-18
• 1.4 主要試劑配制18-19
• 2 試驗方法19-22
• 2.1 制作大鼠神經(jīng)痛模型19
• 2.2 大鼠機械性疼痛行為測試19-20
• 2.3 大鼠灌流取材20
• 2.4 組織包埋20-21
• 2.5 冰凍切片21
• 2.6 免疫熒光染色21
• 2.7 熒光染色分析21-22
• 3 給藥方案22-24
• 3.1 單次灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的作用22
• 3.2 SNL脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)前后連續(xù)灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響22
• 3.3 替泊沙林對神經(jīng)痛后期大鼠機械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響22-24
• 4 統(tǒng)計學處理24-25
• 5 結(jié)果25-35
• 5.1 大鼠手術(shù)前后疼痛行為經(jīng)時變化過程25
• 5.2 單次灌服替泊沙林后機械縮足閾值變化25-26
• 5.3 SNL脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)前后連續(xù)灌服替泊沙林對神經(jīng)病理性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響26-31
• 5.4 替泊沙林對神經(jīng)痛后期大鼠機械性疼痛的抑制作用及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的影響31-35
• 6 討論35-39
• 7 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-61
• 參考文獻56-61
• 附圖 161-62
• 致謝62

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本文編號：269746