本文關(guān)鍵詞：吖啶類(lèi)衍生物L(fēng)TW02抗腫瘤多藥耐藥作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?評(píng)價(jià)新型吖啶類(lèi)衍生物L(fēng)TW02的體外抗腫瘤活性及抗腫瘤多藥耐藥作用,并探討其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:以K562(人白血病細(xì)胞)、K562/ADM(耐阿霉素人白血病細(xì)胞)為研究對(duì)象,MTT法測(cè)定K562/ADM的耐藥倍數(shù);MTT法檢測(cè)LTW02的抗腫瘤活性;羅丹明蓄積實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LTW02對(duì)P-gp功能的影響;Hoechst 33342染色并通過(guò)高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)觀察LTW02作用后細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化;PI染色并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析LTW02對(duì)細(xì)胞周期的影響;RH123/Hoechst 33342染色高內(nèi)涵檢測(cè)線粒體膜電位;MDC、Lyso-Tracker Red熒光染色法流式檢測(cè)分析細(xì)胞自噬的情況;通過(guò)免疫印跡法來(lái)檢測(cè)P-gp、Caspases家族,Bcl-2家族,細(xì)胞色素c、p53、LC3、BECN1、m TOR等蛋白的表達(dá),并分析了其相互關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,阿霉素對(duì)敏感細(xì)胞株K562的IC50為(1.62±0.10)μg/m L,對(duì)耐藥細(xì)胞株K562/ADM的IC50為(178.14±7.72)μg/m L,耐藥倍數(shù)為110倍。MTT法檢測(cè)顯示,LTW02對(duì)白血病敏感細(xì)胞株K562和耐藥細(xì)胞株K562/ADM均表現(xiàn)出強(qiáng)的細(xì)胞毒性,其48 h的IC50分別為(15.09±0.19)μM、(14.96±0.26)μM,并且LTW02對(duì)K562/ADM的細(xì)胞毒作用呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性。羅丹明蓄積實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LTW02能夠濃度依賴(lài)性增加Rh123在細(xì)胞內(nèi)的蓄積。Western Blot進(jìn)一步檢測(cè)到LTW02使K562/ADM細(xì)胞中的P-gp的表達(dá)降低。Hoechst 33342染色及細(xì)胞周期檢測(cè)均證實(shí),LTW02能濃度依賴(lài)性誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞K562/ADM發(fā)生凋亡。LTW02作用于細(xì)胞后,在形態(tài)上可見(jiàn)濃染致密的顆粒狀熒光,并有典型的凋亡小體生成。PI染色法顯示,LTW02對(duì)K562/ADM細(xì)胞周期影響不大,但在DNA直方圖中出現(xiàn)亞二倍體峰(凋亡細(xì)胞峰),并且隨著LTW02濃度增加,亞二倍體峰比列增大。為進(jìn)一步研究LTW02誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡的機(jī)制,通過(guò)RH123/Hoechst 33342染色來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位,高內(nèi)涵檢測(cè)結(jié)果顯示,LTW02能夠下調(diào)K562/ADM細(xì)胞線粒體膜電位。Western Blot分析證實(shí),LTW02可以通過(guò)改變細(xì)胞線粒體膜電位導(dǎo)致線粒體釋放細(xì)胞色素c,細(xì)胞色素c進(jìn)入細(xì)胞之后,激活Caspases-9、Caspases-3,啟動(dòng)線粒體凋亡途徑。我們還發(fā)現(xiàn)LTW02下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2,上調(diào)促凋亡蛋白Bax,導(dǎo)致Bcl-2家族成員抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白的比值下降,使耐藥細(xì)胞K562/ADM發(fā)生凋亡。另外,LTW02還可以上調(diào)p53的表達(dá)。MDC染色及Lyso-Tracker Red染色法均證實(shí),LTW02能夠誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞發(fā)生自噬。通過(guò)Western Blot分析可知,經(jīng)LTW02處理后的細(xì)胞,自噬相關(guān)蛋白BECN1表達(dá)增多,LC3Ⅰ型向Ⅱ型轉(zhuǎn)化增多。另外,我們還發(fā)現(xiàn)m TOR表達(dá)減少。結(jié)論:吖啶類(lèi)衍生物L(fēng)TW02對(duì)多藥耐藥細(xì)胞株K562/ADM的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用,其通過(guò)抑制P-gp的功能及表達(dá),誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬,發(fā)揮抗K562/ADM細(xì)胞多藥耐藥作用。
【關(guān)鍵詞】：吖啶類(lèi)衍生物 多藥耐藥 P-糖蛋白 凋亡 自噬
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-26
• 1 引言12
• 2 吖啶類(lèi)化合物的研究進(jìn)展12-14
• 2.1 概述12-13
• 2.2 吖啶類(lèi)化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀13-14
• 2.3 吖啶類(lèi)化合物的抗腫瘤研究進(jìn)展14
• 3 多藥耐藥的形成機(jī)制14-17
• 3.1 MDR基因及其編碼的P-糖蛋白高表達(dá)14-15
• 3.2 相關(guān)蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥15-17
• 3.3 酶介導(dǎo)的多藥耐藥17
• 4 細(xì)胞死亡17-20
• 4.1 細(xì)胞凋亡17-18
• 4.2 細(xì)胞自噬18-20
• 參考文獻(xiàn)20-26
• 第二章 LTW02對(duì)K562和K562/ADM細(xì)胞增殖的影響26-36
• 1 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 1.1 腫瘤細(xì)胞株26
• 1.2 試劑及主要溶液的配制26-27
• 1.3 主要儀器27-28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-30
• 2.1 細(xì)胞株的復(fù)蘇28
• 2.2 細(xì)胞株的培養(yǎng)28
• 2.3 細(xì)胞株的凍存28-29
• 2.4 倒置相差顯微鏡觀察耐藥細(xì)胞K562/ADM形態(tài)29
• 2.5 MTT比色法檢測(cè)耐藥細(xì)胞K562/ADM的耐藥倍數(shù)29
• 2.6 MTT比色法檢測(cè)LTW02對(duì)K562和K562/ADM細(xì)胞的增殖作用29-30
• 2.7 統(tǒng)計(jì)分析30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-32
• 3.1 倒置相差顯微鏡觀察耐藥細(xì)胞K562/ADM的形態(tài)30
• 3.2 阿霉素對(duì)K562及K562/ADM細(xì)胞的毒性30-31
• 3.3 LTW02對(duì)K562和K562/ADM細(xì)胞增值的影響31-32
• 4 討論32-33
• 5 小結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第三章 LTW02抗腫瘤多藥耐藥機(jī)制研究36-62
• 第一節(jié) LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞K562/ADM P-gp的影響36-44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 1.1 腫瘤細(xì)胞株36
• 1.2 試劑及主要溶液的配制36-38
• 1.3 主要儀器38
• 2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 2.1 羅丹明蓄積實(shí)驗(yàn)38
• 2.2 Western Blot檢測(cè)P-gp的表達(dá)38-40
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析40
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-42
• 3.1 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞P-gp功能的影響40-41
• 3.2 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞P-gp表達(dá)的影響41-42
• 4 討論42-43
• 5 小結(jié)43-44
• 第二節(jié) LTW02誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞K562/ADM凋亡的研究44-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料44
• 1.1 腫瘤細(xì)胞株44
• 1.2 試劑及主要溶液的配制44
• 1.3 主要儀器44
• 2 實(shí)驗(yàn)方法44-46
• 2.1 Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)44-45
• 2.2 PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期45
• 2.3 Rh123/ Hoechst33342檢測(cè)細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化45
• 2.4 Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)45
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析45-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-50
• 3.1 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞K562/ADM形態(tài)學(xué)的影響46
• 3.2 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞K562/ADM細(xì)胞周期的影響46-47
• 3.3 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞線粒體跨膜電位的影響47-48
• 3.4 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響48-50
• 4 討論50-51
• 5 小結(jié)51-52
• 第三節(jié) LTW02誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞K562/ADM自噬的研究52-58
• 1 實(shí)驗(yàn)材料52
• 1.1 腫瘤細(xì)胞株52
• 1.2 試劑及主要溶液的配制52
• 1.3 主要儀器52
• 2 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 2.1 MDC染色法檢測(cè)細(xì)胞的自噬情況52-53
• 2.2 Lyso-Tracker Red染色法檢測(cè)細(xì)胞的自噬情況53
• 2.3 Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)53
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析53
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-56
• 3.1 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞K562/ADM的自噬誘導(dǎo)作用53-54
• 3.2 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞K562/ADM溶酶體的影響54-55
• 3.3 LTW02對(duì)耐藥細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的影響55-56
• 4 討論56-57
• 5 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 附錄62-64
• 英文縮略表62-64
• 致謝64-65

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郎許亮;欒旭東;高春梅;蔣宇揚(yáng);;吖啶類(lèi)化合物在抗腫瘤方面的研究進(jìn)展[J];化學(xué)進(jìn)展;2012年08期

2 徐蕓;;吖啶化合物的遺傳效應(yīng)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);1980年02期

3 謝克勤,許建剛;腫瘤化學(xué)治療藥物的研究——9-肼基吖啶衍生物的合成[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1984年06期

4 龐先勇，，韓靈翠，吳家玲;吖啶類(lèi)新藥的定量構(gòu)效關(guān)系研究[J];太原工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1994年01期

5 穆赫塔爾·伊米爾艾山;王婷;薩提瓦力迪·海力力;庫(kù)爾班·吾斯曼;吐?tīng)柡椤べI(mǎi)買(mǎi)提;;含吖啶基的新型二氧代氮雜茂并[3',4'-d]異VA唑衍生物的合成及其生物活性研究[J];有機(jī)化學(xué);2010年12期

6 張葆s

本文編號(hào)：266853