本文關(guān)鍵詞：SalB對阿霉素誘導(dǎo)心臟毒性的保護(hù)作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、研究目的本文通過建立阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性大鼠模型和阿霉素刺激體外培養(yǎng)的H9C2心肌細(xì)胞,同時(shí)給予SalB進(jìn)行干預(yù),探討SalB改善阿霉素心臟毒性的作用以及分子機(jī)制,為臨床蒽環(huán)類藥物化療方案中心臟保護(hù)劑的運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。二、實(shí)驗(yàn)研究(一)模型的制備與判定本實(shí)驗(yàn)采用以劑量遞增(1,1.5,2,2.5,3mg·kg-1)的方式,按照體重以lm·100g-1每隔2天腹腔注射阿霉素,復(fù)制大鼠心衰模型。4周后觀察到大鼠萎靡不振、活動(dòng)、進(jìn)食減少、呼吸加快、體溫下降、體重明顯減輕,且左心室內(nèi)壓降低至正常值的2/3,符合Bishop關(guān)于慢性心衰動(dòng)物模型的標(biāo)準(zhǔn),表明阿霉素方法復(fù)制心臟毒性模型成功。(二)SalB對阿霉素誘導(dǎo)心臟毒性大鼠的保護(hù)作用以及機(jī)制研究1.SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響。本實(shí)驗(yàn)采用MAP生理記錄儀檢測大鼠左心室收縮壓LVSP,左心室舒張壓LVDP,左心室最大上升速率(+)dp/dt,左心室最大下降速率(-)dp/dt,動(dòng)脈收縮壓ASP以及心率HR。結(jié)果顯示：與模型組相比,隨著給藥持續(xù)時(shí)間的增加,SalB各組呈劑量依賴性地升高大鼠LVSP. (+)dp/dt、HR和ASP,降低大鼠(-)dp/dt、LVDP等參數(shù)(P0.05)。表明SalB能夠緩解阿霉素引起心功能的降低。2. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠組織形態(tài)方面的影響。制作病理心肌組織切片,進(jìn)行HE、Masson和8-OHdG免疫組化染色,觀察Sa1B對膠原纖維、間質(zhì)形態(tài)以及炎癥浸潤的影響。病理結(jié)果顯示SalB能明顯減輕阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的病變、減少炎癥浸潤,降低膠原纖維的含量和8-OHdG的表達(dá),對心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)具有保護(hù)作用(P0.05)3. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠NO、TNOS、TSH、SOD、MDA的影響。采用試劑盒檢測大鼠血清和心臟組織中丙二醛(MDA)、超氧岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)總一氧化氮合成酶(TNOS)以及總巰基(TSH)含量變化。結(jié)果顯示：與模型組相比,隨著給藥持續(xù)時(shí)間的增加,不同劑量的SalB能明顯降低模型組大鼠心臟組織中MDA的含量,降低血清TNOS活性,抑制NO的生成,減少自由基對心臟的損傷。SalB還能增強(qiáng)TSH、SOD的活性,增加機(jī)體清除自由基的能力,對心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用(P0.01)4. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6的影響。采用ELISA法檢測血清中TNF-α、IL-6的活性,觀察不同劑量的SalB對大鼠血清中TNF-a, IL-6的活性影響。結(jié)果顯示：SalB 25.4和12.5mg·kg-1劑量組能顯著降低阿霉素誘導(dǎo)的TNF-a的生成(P0.05,P0.01),同時(shí)不同劑量的SalB均可抑制大鼠血清中IL-6的活性(P0.01)。以上表明SalB能顯著抑制炎癥因子的生成,從而減少炎癥誘發(fā)的心肌損傷,起到對心臟的保護(hù)作用。5. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠NF-kB的影響。采用Western Blot檢測心臟組織NF-kB蛋白表達(dá),觀察不同劑量的SalB對NF-kB蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組阿霉素使大鼠心肌細(xì)胞中NF-kB大量表達(dá)(P0.01)oSalB不同劑量組明顯降低心臟組織中NF-kB表達(dá),抑制了一系列促凋亡基因的活化和信號(hào)通路,降低細(xì)胞凋亡的發(fā)生率(P0.01)。6. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠SIRTl及下游蛋白表達(dá)的影響。采用Western Blot方法檢測SalB對阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性大鼠心臟組織中SIRT1、P-FOXO3a、MnSOD蛋白表達(dá)的影響。Western Blot結(jié)果顯示：模型組阿霉素下調(diào)心肌細(xì)胞的SIRT1,P-FOXO3a,MnSOD的表達(dá),Sa1B不同劑量組顯著增加SIRT1,P-FOXO3a,MnSOD的蛋白表達(dá)(P0.01)。提示,SalB降低阿霉素心臟毒性與SIRT1蛋白有關(guān)。(三) SalB對阿霉素誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞的作用機(jī)理研究1.MTT篩選最佳阿霉素和SalB濃度。采用MTT細(xì)胞增殖與毒性試劑盒篩選最佳阿霉素和SalB的濃度。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不同濃度的阿霉素對H9C2心肌細(xì)胞活性呈現(xiàn)抑制作用。2umol·L-1濃度的阿霉素刺激12h后,可顯著抑制H9C2心肌細(xì)胞的活力(P0.01)。而SalB各給藥組對H9C2心肌細(xì)胞均有不同程度的增殖作用,呈一定的量效關(guān)系,60umol·L-1濃度的SalB刺激12h后細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)(P0.01)。2. SalB對阿霉素誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。以H9C2心肌細(xì)胞為研究對象,應(yīng)用阿霉素和煙酰胺進(jìn)行干預(yù),采用倒置顯微鏡觀察SalB對阿霉素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞形態(tài)的影響,通過流式細(xì)胞儀檢測心肌細(xì)胞中線粒體膜電位大��；采用DCFH-DA熒光探針檢測心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的含量變化。結(jié)果顯示SalB能顯著改善阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的異常變化,降低細(xì)胞的死亡率(P0.01),減少心肌細(xì)胞內(nèi)ROS含量的增加(P0.01),升高阿霉素導(dǎo)致的線粒體膜電位的降低(P0.01)。煙酰胺能抑制SalB對其的保護(hù)作用(P0.01)。3. SalB對阿霉素誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞毒性中的氧化應(yīng)激標(biāo)志物SIRTl蛋白表達(dá)影響。采用Western Blot方法檢測SalB對阿霉素誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞毒性的氧化應(yīng)激標(biāo)志物SIRTl蛋白、FOXO3a磷酸化蛋白、MnSOD蛋白的表達(dá)水平。Western Blot結(jié)果顯示：SalB能顯著上調(diào)SIRT1蛋白水平的表達(dá)(P0.01)、顯著增加FOXO3a的蛋白磷酸化水平(P0.01)、顯著上調(diào)MnSOD蛋白表達(dá)量(P0.01)。SIRT1特異性抑制劑煙酰胺能明顯地阻斷SalB對SIRTl蛋白的激活(P0.01)。以上提示,SalB能上調(diào)氧化應(yīng)激標(biāo)志物SIRTl的蛋白。對阿霉素誘導(dǎo)的心肌氧化損傷具有保護(hù)作用。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)論SalB改善了大鼠阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性,其機(jī)制可能是SalB降低氧化應(yīng)激標(biāo)志物SIRT1蛋白有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：阿霉素心臟毒性 H9C2心肌細(xì)胞 線粒體 ROS 氧化應(yīng)激 凋亡 SalB
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 英文縮略詞11-12
• 前言12-16
• 一、研究背景12-13
• 二、研究現(xiàn)狀13-14
• 三、研究目的14
• 四、研究設(shè)想14
• 五、結(jié)果和意義14-15
• 參考文獻(xiàn)15-16
• 第一章 丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性干預(yù)研究16-82
• 一、阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠模型的制備16-22
• 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 實(shí)驗(yàn)方法17-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-20
• 討論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-22
• 二、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響22-38
• 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-35
• 討論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 三、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)的影響38-47
• 實(shí)驗(yàn)樹料38-39
• 實(shí)驗(yàn)方法39-41
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-44
• 討論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 四、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠血清NO、TNOS、TSH含量的影響47-58
• 實(shí)驗(yàn)材料47
• 實(shí)驗(yàn)方法47-50
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-55
• 討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-58
• 五、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠心臟組織SOD、MDA含量的影響58-63
• 實(shí)驗(yàn)材料58
• 實(shí)驗(yàn)方法58-60
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果60-62
• 討論62
• 參考文獻(xiàn)62-63
• 六、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠血清炎癥因子TNF-α、IL-6的影響63-69
• 實(shí)驗(yàn)材料63
• 實(shí)驗(yàn)方法63-65
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-67
• 討論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-69
• 七、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠心臟NF-kB的影響69-76
• 實(shí)驗(yàn)材料69-71
• 實(shí)驗(yàn)方法71-73
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果73-74
• 討論74-75
• 參考文獻(xiàn)75-76
• 八、丹酚酸B對大鼠心臟組織SIRT1、FOX03a、MnSOD蛋白表達(dá)的影響76-82
• 實(shí)驗(yàn)材料76
• 實(shí)驗(yàn)方法76
• 統(tǒng)計(jì)方法76-77
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果77-79
• 討論79-81
• 參考文獻(xiàn)81-82
• 第二章 丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞的作用機(jī)理研究82-107
• 一、阿霉素對H9C2心肌細(xì)胞增殖和毒性的影響82-89
• 實(shí)驗(yàn)試劑、材料、儀器82-83
• 試劑的配制83-84
• 實(shí)驗(yàn)方法84-85
• 統(tǒng)計(jì)方法85
• 結(jié)果85-87
• 討論87-88
• 參考文獻(xiàn)88-89
• 二、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞的保護(hù)作用89-100
• 實(shí)驗(yàn)試劑、材料、儀器89-90
• 試劑的配制90
• 實(shí)驗(yàn)方法90-93
• 統(tǒng)計(jì)方法93
• 結(jié)果93-98
• 討論98-99
• 參考文獻(xiàn)99-100
• 三、丹酚酸B對阿霉素誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞SIRT1蛋白及下游信號(hào)通路的影響100-107
• 實(shí)驗(yàn)試劑、材料、儀器100
• 試劑的配制100
• 實(shí)驗(yàn)方法100-101
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果101-104
• 討論104-105
• 參考文獻(xiàn)105-107
• 全文總結(jié)107-108
• 綜述108-116
• 參考文獻(xiàn)113-116
• 攻讀碩士期間取得的學(xué)術(shù)成果116-117
• 致謝117

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：SalB對阿霉素誘導(dǎo)心臟毒性的保護(hù)作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：266875