發(fā)布時(shí)間：2017-04-05 17:06

  本文關(guān)鍵詞：兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及其載體的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:于體外對(duì)新西蘭白兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),分別采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法,并對(duì)兩種不同方法進(jìn)行比較。應(yīng)用培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和羊膜構(gòu)建結(jié)膜缺損的生物學(xué)修復(fù)材料。方法:1正常的3月齡的新西蘭白兔,在無(wú)菌條件下,行骨髓穿刺獲得新西蘭白兔骨髓,分別采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離、純化、培養(yǎng),并進(jìn)行傳代觀察。2分別將第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于預(yù)置蓋玻片的六孔培養(yǎng)板中,細(xì)胞90%以上融合時(shí),對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫組化染色,并對(duì)兩種方法培養(yǎng)細(xì)胞的免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。3將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種到羊膜基底面,待細(xì)胞融合,取材后于掃描電鏡下觀察細(xì)胞與羊膜的貼合狀況,于透射電鏡下觀察細(xì)胞情況。結(jié)果:1兩種方法培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)相似。原代培養(yǎng)的新西蘭白兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈簇狀、貼壁呈集落生長(zhǎng),細(xì)胞形態(tài)為梭形、多角形,傳代后細(xì)胞形態(tài)較為均一,分布均勻。細(xì)胞增長(zhǎng)活躍、傳代周期短。2免疫組織化學(xué)染色CD34(-)、CD44(+)。3全骨髓培養(yǎng)法較密度梯度離心法CD44的平均光密度值低,CD34的平均光密度值高。4電鏡下觀察到細(xì)胞可以生長(zhǎng)于羊膜基底面,與羊膜良好貼合。結(jié)論:1利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法均可以得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并可以傳代,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。2免疫組織化學(xué)結(jié)果支持所獲得的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。3全骨髓貼壁培養(yǎng)法較密度梯度離心法培養(yǎng)的細(xì)胞純度低。4羊膜可以作為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞載體來(lái)構(gòu)建結(jié)膜缺損修復(fù)材料。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 培養(yǎng)方法 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 免疫組織化學(xué)染色 平均光密度值 羊膜
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R779.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫(xiě)8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-26
• 附表26-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展35-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47

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本文編號(hào)：287358