目的對比大鼠長骨骨外膜間充質(zhì)干細(xì)胞(PSCs)、骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞(ESCs)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在骨折后骨愈合過程中分化、增殖和凋亡的生物學(xué)差異,并探討吉非替尼(Gefitinib)抑制EGFR信號通路后對大鼠長骨PSCs、ESCs和BMSCs生物學(xué)功能的影響的差異。方法取健康雄性4周齡SD大鼠,右下肢股骨骨折模型造模成功后隨機(jī)分為2組:實驗組予以EGFR信號通路抑制劑吉非替尼100mg/Kg/D溶于0.2g/40ml甲基纖維素灌胃,對照組予以等劑量的甲基纖維素灌胃。術(shù)后1w取雙側(cè)股骨及脛骨,分別分離提取PSCs、ESCs和BMSCs,通過克隆形成能力CFU檢測、細(xì)胞表面抗原CD29、CD90、CD34、CD45的表達(dá)及多向分化(成骨、成軟骨、成脂)能力鑒定其干細(xì)胞屬性。PCR檢測成骨分化相關(guān)基因(osteoca1cin、bsp、osterix、RUNX2)、成軟骨分化相關(guān)基因(aggrecan,Col2a1,Sox9)、成脂分化相關(guān)基因(1p1,pparγ,cebpa)、細(xì)胞周期抑制因子相關(guān)基因(p15,p16,p21,p27)以及凋亡相關(guān)基因(bcl2,bax,cas...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖２．?ＣＦＵ檢測的結(jié)晶紫染色：（Ａ）結(jié)晶紫染色；（Ｂ）ＣＦｉｒ細(xì)胞數(shù)；（Ｃ）ＣＦＵ＇顆粒直徑

?顯較對照組�。ㄒ妶D１．Ｃ）。然后再進(jìn)行結(jié)晶紫染色，可見較培養(yǎng)皿中形成較黑??色顆粒沉淀更大藍(lán)染顆粒沉淀（見圖２．Ａ），顯微鏡下比較ＰＳＣｓ、ＥＳＣｓ和ＢＭＳＣｓ??形成藍(lán)染顆粒沉淀ｃＦｉｒ細(xì)胞數(shù)及沉淀直徑大小，ｐｓｃｓ顆粒中ｃｆｉｔ細(xì)胞數(shù)明顯較??ＥＳＣｓ和ＢＭＳＣｓ大，ＥＳＣ....

圖３?Ｖｏｎ?ｋｏｓｓａ染色觀察（Ｘ２００）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｏｂｓｅｒｖａｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｖｏｎ?ｋｏｓｓａ?ｓｔａｉｎｉｎｇ（?ｘ２〇〇）??

ｖｏｎ?Ｋｏｓｓａ染色、阿爾新藍(lán)染色和油紅０染色，倒置顯微鏡下觀察各樣本分化情??況。Ｖｏｎ?ｋｏｓｓａ染色后鏡下可見礦化結(jié)節(jié)形成ＰＳＣｓ最大最明顯，ＥＳＣｓ次之，ＢＭＳＣｓ??最小，實驗組均較對照組礦化結(jié)節(jié)更大更明顯（見圖３）。阿爾新藍(lán)染色可見細(xì)??胞內(nèi)淡藍(lán)色顆粒ＰＳＣｓ最多最....

圖４阿爾新藍(lán)染色觀察（Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ?４?Ｏｂｓｅｒｖａｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｌｃｉａｎ?ｂｌｕｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ（?ｘ?１００）??

??淡藍(lán)色顆粒更多更明顯（見圖４）。油紅０染色可見細(xì)胞內(nèi)紅色顆粒ＰＳＣｓ最多??最大，ＥＳＣｓ次之，ＢＭＳＣｓ最少，實驗組均較對照組紅色顆粒更多更明顯（見圖５）。??ＰＳＣｓ?ＥＳＣｓ?ＢＭＳＣｓ??實驗組％?ｉ??？ｊ，?＼?ｔ?ＳＮ?Ｌ，?Ｈ，?．?＊?ｒＣ?ｋ‘?■?＇ｉ?....

圖５油紅０染色觀察（Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ?５?Ｏｂｓｅｒｖａｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｏｉｌ?ｒｅｄ?Ｏ?ｓｔａｉｎｉｎｇ（?ｘｌ〇〇）??ｊ??

?淡藍(lán)色顆粒更多更明顯（見圖４）。油紅０染色可見細(xì)胞內(nèi)紅色顆粒ＰＳＣｓ最多??最大，ＥＳＣｓ次之，ＢＭＳＣｓ最少，實驗組均較對照組紅色顆粒更多更明顯（見圖５）。??ＰＳＣｓ?ＥＳＣｓ?ＢＭＳＣｓ??實驗組％?ｉ??？ｊ，?＼?ｔ?ＳＮ?Ｌ，?Ｈ，?．?＊?ｒＣ?ｋ‘?■?＇ｉ?｜....

本文編號：3975990