發(fā)布時間：2017-07-01 23:06

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌rv3295基因的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：以結(jié)核分枝桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增了rv3295基因;將其克隆至表達(dá)載體pET-22b中,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-22b-Rv3295;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出了Rv3295蛋白。通過親和層析純化,以該重組蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠,利用細(xì)胞融合篩選制備抗該重組蛋白的單克隆抗體;采用Western-blot驗(yàn)證單克隆抗體的特異性;通過亞型鑒定試劑盒鑒定單克隆抗體的亞型。結(jié)果顯示,Rv3295蛋白以可溶形式表達(dá),蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量大小為25ku。獲得1株抗該重組蛋白的單克隆抗體1F7,其亞型為IgG1/κ;Western-blot結(jié)果顯示,該抗體具有較好的特異性。本研究制備的Rv3295蛋白的單克隆抗體對于研究Rv3295蛋白的功能及其與DNA之間的互作奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動物細(xì)菌病研究室;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 rv基因 原核表達(dá) 單克隆抗體
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)項(xiàng)目(2012CB518801) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201920,31272538)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是結(jié)核病(tuberculosis)的病原菌[1],與其他由細(xì)菌引起的感染相比,結(jié)核病潛伏期長且可侵犯全身各個器官。全球約三分之一的人口感染了結(jié)核分枝桿菌,每年將導(dǎo)致約兩百萬人死亡[2]。世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì)每年大約新增加800萬結(jié)核

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳蘭英,趙楨,王曉濤,屈二軍,陳建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宮頸癌中高表達(dá)和癌變關(guān)系的研究[J];癌變.畸變.突變;2005年04期

2 程烽;盛燕;施靜藝;陳漪;徐潮;劉智;梁軍;潘春明;朱忠勇;宋懷東;;重疊延伸PCR法構(gòu)建UGRP1基因啟動子的點(diǎn)突變表達(dá)載體[J];癌變.畸變.突變;2007年01期

3 溫居一;張積仁;李鵬;張軍;王斌;;NADH對二乙基亞硝胺所致L02人肝細(xì)胞株p53基因突變和c-erbB2基因表達(dá)的影響[J];癌變.畸變.突變;2009年05期

4 金藝鳳;李鐵臣;王瑩;劉東華;孫珍貴;;ERCC1和XPD單核苷酸多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌鉑類化療敏感性的關(guān)系[J];癌變·畸變·突變;2010年05期

5 王繼英;武英;郭建鳳;呼紅梅;張印;;萊蕪黑豬保種群促卵泡素β亞基和雌激素受體基因、基因型變化情況[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年01期

6 陳靜;胡曉輝;苗華榮;張建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技術(shù)體系的優(yōu)化[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年05期

7 陳長寶;朱樹華;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果實(shí)的總RNA[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年05期

8 葛宏華,肖亞中,姚建平;人心室肌球蛋白輕鏈1基因的克隆及其體外的表達(dá)與純化[J];安徽大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2004年06期

9 侯新東;盛桂蓮;張樺;臘萍;;質(zhì)粒DNA提取方法的探討[J];安徽農(nóng)學(xué)通報;2006年13期

10 朱美霞,孟艷玲,陳良兵;大豆與棉花抗性基因類似物的同源性比較及其進(jìn)化分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱林;江昌俊;葉愛華;李葉云;余梅;鄧威威;;茶樹ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建[A];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)理論與實(shí)踐——安徽現(xiàn)代農(nóng)業(yè)博士科技論壇論文集[C];2007年

2 徐波;張莉;李啟云;王景會;姜媛媛;楊貞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大腸桿菌中的表達(dá)[A];中國奶業(yè)協(xié)會年會論文集2008（下冊）[C];2008年

3 劉冬光;廖娟紅;于清龍;陳穎鈺;陳煥春;郭愛珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制備及在牛結(jié)核診斷中的初步應(yīng)用[A];中國奶業(yè)協(xié)會年會論文集2009（上冊）[C];2009年

4 張海龍;田兆豐;董志;張晏如;張飛云;;多花黑麥草斑駁病毒外殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達(dá)[A];2010植物免疫機(jī)制研究及其調(diào)控研討會論文集[C];2010年

5 閆云君;蔡勇;楊江科;;基于易錯POR技術(shù)的短小芽胞桿菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向進(jìn)化[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國科協(xié)年會論文集（一）[C];2007年

6 李玫;廖寶文;;紅樹林濕地烷烴降解菌的分離篩選[A];第十三屆中國科協(xié)年會第16分會場-沿海生態(tài)建設(shè)與城鄉(xiāng)人居環(huán)境學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

7 郭奕斌;陳路明;孟亞仙;王晶晶;杜傳書;潘敬新;;一個廣東四川家庭的IDS基因新突變[A];第六屆全國優(yōu)生科學(xué)大會論文匯編[C];2006年

8 于占東;趙雙宜;何啟偉;王翠花;牟晉華;劉春香;;抗蕪菁花葉病毒轉(zhuǎn)基因大白菜的研究[A];中國園藝學(xué)會第十屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2005年

9 龔束芳;楊濤;車代弟;;偃麥草根莖非質(zhì)體蛋白質(zhì)修飾冰晶能力的觀察[A];2007年中國園藝學(xué)會觀賞園藝專業(yè)委員會年會論文集[C];2007年

10 王英;滕齊輝;曹慧;胡鋒;崔中利;;淹水和旱作水稻土中細(xì)菌群落多樣性的空間分布[A];第四次全國土壤生物和生物化學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐榮燕;嗜熱真菌糖苷酶的基因克隆、表達(dá)與分子改造[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 殷慧群;豬誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的建立[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 楊瑞梅;單鏈抗體介導(dǎo)狂犬病毒shRNA靶向制劑的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 宋翠平;H5N1禽流感和鵝Ⅰ型副粘病毒分離株的生物學(xué)特性及感染性的研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

5 郭新軍;擬黑多刺蟻肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2與肌鈣蛋白Ⅰ亞基基因的克隆及其在發(fā)育中的表達(dá)研究[D];陜西師范大學(xué);2010年

6 生書晶;何首烏芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鑒定及轉(zhuǎn)化擬南芥研究[D];華南理工大學(xué);2010年

7 梁東;蘋果山梨醇代謝相關(guān)基因的分子特性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

8 朱彥濤;甘藍(lán)型油菜Polima CMS和陜2A CMS的形態(tài)和生化特征及其胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的比較研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

9 溫武軍;鯉抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山東師范大學(xué);2011年

10 王秀娟;嗜熱真菌纖維二糖水解酶（CBHⅠ、CBHⅡ）和內(nèi)切葡聚糖酶（EGⅠ）的分子改造[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高紅梅;ETEC對斷奶腹瀉仔豬胃腸道緊密連接蛋白ZO-1的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 王樹云;斑點(diǎn)叉尾洶病毒ORF6和ORF10基因的原核表達(dá)及其功能的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 汪艷杰;水稻polycomb基因家族甲基化狀態(tài)初步檢測[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 王偉;惡臭假單胞菌表面展示細(xì)菌漆酶及對染料的脫色性能[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 黃輝;哈維弧菌表面抗原的克隆和真核表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 段龍川;產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 龔瑞;粘附素ClfA和Cna對金黃色葡萄球菌乳腺炎的免疫保護(hù)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 劉源;豬胸膜肺炎放線桿菌雙組分調(diào)控系統(tǒng)ΔnarQ/narP突變株構(gòu)建及功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 李善文;蟾蜍靈對大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及凋亡的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

10 辛寧;PDX-1真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2010年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高紅旺,張秀榮,許英愛,王雅君;單克隆抗體在抗癌領(lǐng)域中的應(yīng)用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年02期

2 汪保安,汪寅章,夏風(fēng)城,陸思珍,黃兆堅(jiān),郭愛巖,馬芳玲,張育青;促腎上腺皮質(zhì)激素單克隆抗體的篩選和鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2001年05期

3 楊聯(lián)萍,單中元,佟明華,易學(xué)瑞,萬華印,曾平魯,孔祥平;一組抗重組人肝再生增強(qiáng)因子單克隆抗體的制備與鑒定[J];中國病理生理雜志;2001年05期

4 吳向東,李保仝,邵海楓,宗永蘭,齊名,武建國;人紅細(xì)胞血型糖蛋白A單克隆抗體的初步鑒定[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2001年01期

5 李琦,歐陽為明,賈衛(wèi),劉雪松,韓衛(wèi)寧,劉飛,謝鑫,蘇麗,金伯泉;抗人白細(xì)胞介素-4單克隆抗體的制備及應(yīng)用研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2002年04期

6 楊唐斌,曲麗娜;單克隆抗體研究新進(jìn)展[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2002年06期

7 邵曉楓,熊冬生,李容,彭暉,劉嘉,楊銘,許元富,范冬梅,朱楨平,楊純正;抗KDR3單克隆抗體的制備和生物活性的鑒定[J];中國腫瘤臨床;2003年11期

8 馬穎,鄒全明,朱永紅,羅萍,毛旭虎;抗重組人白細(xì)胞介素18單克隆抗體的制備與特性研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2003年06期

9 霍晨敏,朱昀,孫進(jìn)偉,吳立柱,沈銀柱,黃占景;單克隆抗體制劑的最新進(jìn)展[J];河北師范大學(xué)學(xué)報;2004年05期

10 何忠效;淺談單克隆抗體[J];生物學(xué)通報;2004年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊智紅;熊承良;;尿激酶型纖溶酶原激活因子單克隆抗體的制備及鑒定[A];湘鄂贛首屆性與生殖健康學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

2 李偉;林志;齊衛(wèi)紅;梁春男;楊艷偉;汪巨峰;李波;;抗VEGF單克隆抗體的臨床前安全性評價[A];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

3 沈泓;梅建鳳;朱克寅;李敏;應(yīng)國清;;人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體的制備[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

4 寧云山;司徒維娜;李妍;彭丹丹;洪燕華;劉宜楚;賀福初;孫啟鴻;李明;;人類血漿蛋白單克隆抗體庫的初步建立及應(yīng)用研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會論文摘要論文集[C];2004年

5 尹鐵英;王亞洲;王貴學(xué);;血小板膜糖蛋白單克隆抗體在動脈粥樣硬化性疾病中的應(yīng)用[A];2007第一屆全國介入醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

6 曲海霞;胡和平;孫啟鴻;;鼠抗人醛脫氫酶1A1單克隆抗體的制備與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

7 鞠吉雨;周群芳;王麗娜;邸大琳;;抗人骨橋蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

8 劉健宏;王標(biāo);莊向生;王長兵;周倫江;劉玉濤;;單克隆抗體與免疫熒光染色技術(shù)[A];福建省科協(xié)首屆學(xué)術(shù)年會衛(wèi)星會議——畜牧業(yè)持續(xù)發(fā)展對策學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

9 安星蘭;陸梅生;李萬波;安鐵洙;滕春波;;人肌紅蛋白單克隆抗體的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十七次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2012年

10 邴國霞;張鶴曉;張利峰;吳清民;劉金華;段向英;江育林;;鯉春病毒單克隆抗體的研制及其初步應(yīng)用[A];京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會暨新思想、新觀點(diǎn)、新方法論壇論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 尹暉;單克隆抗體研發(fā)進(jìn)入新階段[N];無錫日報;2010年

2 編譯 李勇;單克隆抗體：生物類似藥開發(fā)的秘鑰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2014年

3 廣凱;單克隆抗體藥物將有大發(fā)展[N];中國醫(yī)藥報;2000年

4 ;單克隆抗體應(yīng)用前景看好[N];中國醫(yī)藥報;2002年

5 黃東臨;羅氏叱咤單克隆抗體市場[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2005年

6 ;單克隆抗體異軍突起[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2003年

7 尹暉;全球最大單克隆抗體研制基地落戶無錫[N];中國醫(yī)藥報;2010年

8 尹暉;最大單克隆抗體研制項(xiàng)目在馬山奠基[N];無錫日報;2010年

9 數(shù)文;羅氏買進(jìn)抗癌單克隆抗體[N];中國醫(yī)藥報;2008年

10 毛文波;單克隆抗體：征服癌癥的新方法[N];科技日報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白宇;馬γ-干擾素單克隆抗體的制備及細(xì)胞免疫評價方法的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

2 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

3 秦克鋒;單純皰疹病毒糖蛋白的特性研究及其單克隆抗體的臨床應(yīng)用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1989年

4 游曉華;腦鈉肽單克隆抗體的制備及初步臨床應(yīng)用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 胡敏;載脂蛋白M重組蛋白和單克隆抗體的制備及其初步臨床應(yīng)用[D];中南大學(xué);2008年

6 溫新宇;人CD38分子的克隆表達(dá)、單克隆抗體的制備及其功能的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 秦迎松;人促血液血管細(xì)胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）單克隆抗體的制備、鑒定及應(yīng)用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

8 張雪芳;抗gremlin 1單克隆抗體的制備和初步鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

9 李振宇;抗FVⅢ-C2區(qū)單克隆抗體的制備及功能研究[D];蘇州大學(xué);2009年

10 夏永娟;抗鰻弧菌獨(dú)特型單克隆抗體的研制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬泓冰;幾種單克隆抗體純化方法的比較性研究[D];蘇州大學(xué);2005年

2 許靜;小鼠抗蛋清提取物單克隆抗體的制備與初步鑒定[D];南昌大學(xué);2007年

3 王林林;抗人早孕因子單克隆抗體的制備[D];鄭州大學(xué);2011年

4 張朋;鯉春病毒血癥病毒單克隆抗體的制備及其免疫學(xué)檢測方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 鄭怡麟;抗人降鈣素原特異性單克隆抗體的制備及其免疫傳感器的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 高曉飛;人紅細(xì)胞血型糖蛋白B單克隆抗體的制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

7 李濤;抗黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備與特性鑒定[D];山東師范大學(xué);2008年

8 何靖玄;琥珀酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶硝基化酪氨酸位點(diǎn)特異單克隆抗體的制備[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 于海雙;普洱茶茶褐素單克隆抗體的制備[D];長春理工大學(xué);2012年

10 譚雯雯;豬β-防御素2多克隆和單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌rv3295基因的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：507773