本文關(guān)鍵詞：致死型埃博拉病毒核酸和抗體檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：埃博拉病毒（EBOV）是一種可以引起人畜共患烈性傳染病的病原體，引起的疾病稱為埃博拉出血熱。此病始發(fā)于1976年埃博拉河流域，故而得名。埃博拉出血熱是一種最急性、烈性、致命的傳染病。人一旦感染埃博拉病毒，死亡率可高達88%。世界衛(wèi)生組織將埃博拉病毒視為對人類危害最為嚴重的病毒之一，將其列為第4級病毒，OIE將其列為A類疾病。雖然我國還沒發(fā)現(xiàn)EBOV，但近年來隨著我國與非洲國家貿(mào)易往來日益增加，該病對我國構(gòu)成潛在的威脅。 為防止埃博拉出血熱入我國，我們建立了兩種針對埃博拉出血熱快速、可靠的診斷技術(shù)。一種是將熒光定量RT—PCR技術(shù)用于埃博拉病毒核酸的檢測，建立了檢測扎伊爾型埃博拉病毒（ZEBOV）和蘇丹型埃博拉病毒（SEBOV）糖蛋白（GP）的熒光定量RT-PCR檢測方法。為了保持熒光定量RT-PCR法的實用性，我們選擇了高度保守糖蛋白作為擴增區(qū)域設(shè)計引物和探針。通過條件優(yōu)化，以10倍系列稀釋質(zhì)粒pblue-SG，pblue-ZG為標準品，進行Real-time PCR擴增，制作標準曲線，并進行重復(fù)性、準確性檢驗及特異性檢測。Real-time PCR檢測結(jié)果表明，蘇丹型和扎伊爾型埃博拉病毒標準曲線相關(guān)系數(shù)均大于0.99，靈敏度可達1.0×101拷貝，高于常規(guī)PCR方法的106～107；同時，7種其他對照烈性病病原體檢測均呈陰性，特異性好。另一種是以埃博拉病毒（EBOV）保守性較高的VP40基因原核表達產(chǎn)物為抗原建立檢測埃博拉出血熱抗體的間接ELISA方法。構(gòu)建VP40蛋白原核表達載體pET22b(+)-VP40，并轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)菌，在1.0mmol/L IPTG和37℃條件下誘導(dǎo)表達目的蛋白，經(jīng)Ni-NTA親和層析純化后進行SDS-PAGE和Western blot鑒定。以該純化蛋白為包被抗原建立監(jiān)測埃博拉出血熱抗體的間接ELISA方法，其敏感性和特異性均為100%。 綜上所述，本實驗建立的兩種檢測致死型EBOV的方法均具有較高的特異性、敏感性和穩(wěn)定性，，為埃博拉出血熱的快速確診和流行病調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：埃博拉病毒 Real-time PCR VP40蛋白 間接ELISA 檢測方法
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：S852.65;R373
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 前言5-6
• 第一篇 文獻綜述6-17
• 第一章 埃博拉出血熱的研究進展6-17
• 1.1 埃博拉出血熱概述6-11
• 1.2 埃博拉出血熱診斷方法概述11-15
• 1.3 小結(jié)15-17
• 第二篇 埃博拉出血熱診斷方法研究內(nèi)容17-36
• 第一章 致死型埃博拉病毒核酸 Real-Time PCR 檢測方法的建立17-26
• 1.1 材料17-18
• 1.2 方法18-20
• 1.3 結(jié)果20-24
• 1.4 討論24-25
• 1.5 小結(jié)25-26
• 第二章 埃博拉病毒 VP40 蛋白的原核表達及其間接 ELISA 檢測方法的建立26-36
• 2.1 材料26-27
• 2.2 方法27-30
• 2.3 結(jié)果30-35
• 2.4 討論35
• 2.5 小結(jié)35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-44
• 作者簡介44-45
• 致謝45

【參考文獻】

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本文編號：440111