本文關鍵詞：穩(wěn)定表達RFP-GFP-LC3的RAW264.7細胞株的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立能夠穩(wěn)定表達紅色熒光蛋白-綠色熒光蛋白-微管相關蛋白輕鏈3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬細胞。方法構建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重組質(zhì)粒載體,將重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞,收集病毒上清后感染RAW264.7細胞。經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達RFP-GFP-LC3的RAW264.7細胞株,用熒光顯微鏡和流式細胞術分析感染效率。饑餓處理穩(wěn)定感染細胞,熒光顯微鏡下觀察RFP-GFP-LC3斑點。結果成功構建了慢病毒p LV-CMV-RFPGFP-LC3,經(jīng)感染和嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7細胞;熒光顯微鏡和流式細胞術顯示RFP和GFP熒光率均達到100%,饑餓處理后自噬斑點顯著增多。結論成功建立穩(wěn)定表達RFP-GFP-LC3的RAW264.7細胞株,為自噬研究建立了可靠細胞平臺。
【作者單位】： 安徽理工大學醫(yī)學院醫(yī)學免疫學與檢驗教研室;安徽理工大學醫(yī)學院附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科;
【關鍵詞】： 自噬 慢病毒 RAW.細胞 穩(wěn)定表達
【基金】：國家自然科學基金(81302524,81202294,81172778) 安徽省自然科學基金(1208085QH162,KJ2013A105) 大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201310361096,AH201310361188,AH201310361189) 安徽理工大學大學生科研項目(2013-2014年)
【分類號】：R392
【正文快照】： 自噬是一個進化上高度保守的進程,從酵母菌細胞到哺乳動物細胞中均已發(fā)現(xiàn)[1]。對于一些難以降解的胞內(nèi)蛋白、細胞器或病原體的過度聚集物,自噬是唯一能有效清除這些聚集體的途徑[2]。自噬缺陷會導致一系列疾病,包括癌癥、神經(jīng)退行性疾病和感染性疾病[3-4]。在哺乳動物細胞中,

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本文編號：429418