本文關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣分化中自噬相關(guān)基因Beclin-1的表達(dá)的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的潛能，但是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期體外培養(yǎng)后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化能力逐漸喪失，其機(jī)制仍不明確。 目的： 1.在實(shí)驗(yàn)室中分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)。 2.利用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及上皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，觀察神經(jīng)元樣分化中細(xì)胞形態(tài)等一系列變化。 3.初步檢測(cè)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣細(xì)胞分化過(guò)程中自噬相關(guān)基因表達(dá)的變化，探討該基因及其相關(guān)意義。 方法： 1.在患者知情條件下抽取骨髓，以肝素抗凝，以Ficoll-Paque密度梯度離心法(無(wú)菌通風(fēng)柜內(nèi)操作)來(lái)獲得人單個(gè)核細(xì)胞，倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，以1.0×106/L的細(xì)胞濃度接種于6孔板，72h換液1次并去除未貼壁細(xì)胞，直到貼壁細(xì)胞的融合率大于80%時(shí)傳代培養(yǎng)，傳代比例為1∶2。 2.傳代培養(yǎng)至細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，接種到預(yù)鋪多聚賴氨酸的玻片上。等到細(xì)胞融合率大于50%時(shí)，采用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子開(kāi)始預(yù)誘導(dǎo)神經(jīng)元樣分化的進(jìn)行。 3.利用表皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，，觀察其形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況。 4.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)神經(jīng)元特異性烯醇化酶等表達(dá)，采用Western blot初步檢測(cè)誘導(dǎo)前后人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬相關(guān)基因Beclin-1表達(dá)的變化。 結(jié)果與結(jié)論： 1.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以于體外培養(yǎng)存活一定時(shí)間，并可以于體外環(huán)境中接受一定程度的預(yù)處理。 2.經(jīng)預(yù)誘導(dǎo)及誘導(dǎo)后，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈典型神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，神經(jīng)元特異性烯醇化酶陽(yáng)性率為78.7%。 3.誘導(dǎo)0.5h后處理組細(xì)胞中Beclin-1的表達(dá)水平有所增加，但1h后開(kāi)始逐漸降低。說(shuō)明體外可以誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，自噬相關(guān)基因表達(dá)活性可能在誘導(dǎo)分化早期呈高表達(dá)，分化過(guò)程中逐漸降低。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 分化 神經(jīng)元 自噬 Beclin-1
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)12-21
• 1. 材料與方法13-17
• 2. 結(jié)果17-19
• 3. 討論19-21
• 第二部分 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的神經(jīng)定向誘導(dǎo)分化21-28
• 1. 材料和方法21-24
• 2. 結(jié)果24-26
• 3. 討論26-28
• 第三部分 誘導(dǎo)細(xì)胞中 Beclin-1 的表達(dá)28-45
• 1. 材料與方法28-36
• 2. 結(jié)果36-38
• 3. 討論38-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 綜述52-66
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 縮略詞表66-67
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文67-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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  本文關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣分化中自噬相關(guān)基因Beclin-1的表達(dá)的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：428981