生物素標記的布魯菌多克隆抗體的制備
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【摘要】:目的制備生物素標記的兔抗牛種布魯菌544A多克隆抗體,并進行鑒定。方法復(fù)蘇并擴大培養(yǎng)牛種布魯菌544A,滅活后制備滅活疫苗,經(jīng)背部皮下多點注射免疫新西蘭大白兔,5次免疫后,經(jīng)心臟采血,分離血清,采用硫酸銨鹽析法對血清中的多克隆抗體進行粗提,再通過蛋白親和柱層析法對抗體進一步純化,利用SDS-PAGE分析抗體的純度,間接ELISA法檢測抗體的效價和特異性,Bradford法檢測抗體的蛋白含量,并利用生物素對抗體進行標記。結(jié)果制備的牛種布魯菌544A的兔多克隆抗體純度較高,效價為1:256 000,特異性較好,蛋白含量為2.83 mg/ml,每摩爾蛋白中標記的生物素摩爾數(shù)為3.09。結(jié)論成功制備了生物素標記的牛種布魯菌多克隆抗體,為下一步研制牛種布魯菌免疫檢測試劑盒奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
【作者單位】: 吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗教研室;吉林出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;
【關(guān)鍵詞】: 布魯菌 多克隆抗體 免疫檢測
【基金】:國家自然科學(xué)基金面上項目(81072337,81473018);國家自然科學(xué)基金青年基金項目(81401721) 吉林大學(xué)“大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃”項目(2014A72317)
【分類號】:R392
【正文快照】: 布魯菌病(Brucellosis)是由布魯菌(Brucella)引起的一種人畜共患傳染病,流行范圍廣,幾乎遍布世界各地,每年約有50萬的新增病例[1-2]。該病被世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)、世界動物衛(wèi)生組織(Office international desépizooties,OIE)、聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(
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