本文關(guān)鍵詞：Accutase消化傳代對人胚胎紋狀體來源神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察人類胚胎紋狀體來源神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)經(jīng)消化酶accutase消化傳代后是否發(fā)生了大量細(xì)胞凋亡。方法:提取人13~18周自然流產(chǎn)胚胎腦組織紋狀體的NSCs,體外形成神經(jīng)球并培養(yǎng)至3~5代。經(jīng)消化酶accutase消化后傳代,運用活性caspase-3染色、TUNEL(Td T-mediated d UTP nick end labeling)染色等方法對多聚甲醛固定的NSCs進(jìn)行凋亡檢測,同時采用Annexin V和Hoechst33342/PI等聯(lián)合染色方法對活細(xì)胞進(jìn)行凋亡鑒定,以確定NSCs在體外傳代后的凋亡情況。結(jié)果:在傳代后檢測的3個時間點(1,24,72 h)中TUNEL染色和活性caspase-3染色均高度重合。傳代后1 h,TUNEL和活性caspase-3染色所檢測到的凋亡率為20%~25%,傳代后24 h增高為75%~80%(P0.01),而傳代后72 h,由于存活下來的細(xì)胞開始增殖,所以整體凋亡率降為60%~70%,明顯低于24 h(P0.01)。結(jié)論:由人類紋狀體來源NSCs形成的神經(jīng)球,經(jīng)accutase消化傳代后24 h內(nèi)即發(fā)生大量細(xì)胞凋亡。對于體外培養(yǎng)的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,最終起到提高細(xì)胞擴(kuò)增能力的有效手段。
【作者單位】： 長治醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)外科;長治醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 神經(jīng)干細(xì)胞 神經(jīng)球 accutase TUNEL 凋亡 活性caspase-
【基金】：山西省中美國際合作項目(2013081054) 長治醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊項目(CX201408)~~
【分類號】：R321
【正文快照】： Methods:The NSCs were isolated from fetuses obtained through spontaneous abortion at 13-18 weeks of pregnancy,which formed neurospheres in vitro.At passages of 3-5,the neurosphereswere disassociated into single cell by accutase digestion and then passage

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：419826