本文關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細胞衰老過程中DNA損傷應(yīng)答特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：正常細胞受到Hayflick限制，不能發(fā)生無限增殖，衰老成為其最終結(jié)局，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)存在少部分細胞發(fā)生衰老逃逸，使這些基因組高度不穩(wěn)定的衰老細胞發(fā)生癌變。干細胞作為成體組織細胞更新來源，具有生存周期長的特點，容易受到各種內(nèi)外因素的作用，相比生命周期短的分化細胞受到更多的DNA損傷，容易導(dǎo)致?lián)p傷的大量積累，而干細胞具有強大的增殖和分化潛能，基因組的不穩(wěn)定更易引發(fā)衰老和癌變。為保證基因組的穩(wěn)定，防止惡性轉(zhuǎn)化，細胞存在一個龐大的網(wǎng)絡(luò)進行“糾錯”，DNA修復(fù)就是其中一種重要機制。對DNA損傷應(yīng)答機制的研究發(fā)現(xiàn)，如果細胞DNA損傷應(yīng)答異常，同樣會出現(xiàn)基因組不穩(wěn)定現(xiàn)象，使細胞易發(fā)生衰老和惡性轉(zhuǎn)化。已有文獻報道，衰老細胞DNA損傷修復(fù)基因表達下調(diào)及核型異常，而在對基因敲除鼠和人類基因缺陷病患者的研究中，也發(fā)現(xiàn)DNA損傷修復(fù)基因缺失的細胞出現(xiàn)早衰現(xiàn)象。由此，我們認為細胞衰老與DNA損傷應(yīng)答，以及腫瘤的發(fā)生具有密切聯(lián)系。然而，衰老細胞的DNA損傷應(yīng)答能力如何并無相關(guān)報道，所以我們提出推斷：干細胞衰老過程中DNA損傷應(yīng)答能力下降可能加速干細胞衰老并且使細胞功能下降，同時破壞細胞凋亡屏障，促發(fā)干細胞惡性轉(zhuǎn)化。 目的： 以氧化損傷和DNA雙鏈斷裂損傷為模型，觀察衰老細胞DNA損傷應(yīng)答情況，探索DNA損傷應(yīng)答異常是衰老細胞基因組不穩(wěn)定性的直接原因。 方法： 1.培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞，用流式細胞技術(shù)和定向誘導(dǎo)分化對細胞進行鑒定。2.衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶檢測細胞衰老情況，BrdU摻入實驗檢測細胞增殖情況，，QPCR檢測衰老相關(guān)基因，建立體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞衰老模型。3.建立氧化損傷和DNA雙鏈斷裂損傷模型觀察細胞DNA損傷和損傷后應(yīng)答情況。通過CCK-8法檢測細胞存活情況檢測細胞對損傷的敏感性，DCFH-DA熒光探針檢測細胞內(nèi)活性氧，單細胞凝膠電泳和γH2AX foci觀察細胞DNA損傷和損傷后應(yīng)答情況，QPCR檢測參與損傷后應(yīng)答相關(guān)基因的表達情況。 結(jié)果與結(jié)論： 1.人骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)長期體外培養(yǎng)至40代以后，衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色陽性細胞明顯增多，增殖能力明顯下降，衰老相關(guān)基因表達增高，提示間充質(zhì)干細胞長期培養(yǎng)后發(fā)生衰老。2.生存曲線結(jié)果顯示H2O2作用下，年輕間充質(zhì)干細胞存活率明顯高于衰老間充質(zhì)干細胞；活性氧及堿性單細胞凝膠電泳結(jié)果顯示，衰老間充質(zhì)干細胞對H2O2損傷更敏感，由H2O2引起的損傷應(yīng)答能力降低，可能與氧化損傷應(yīng)答基因的表達下調(diào)相關(guān)。3.生存曲線結(jié)果顯示博來霉素（BLM）作用下，年輕間充質(zhì)干細胞存活率明顯高于衰老間充質(zhì)干細胞；γH2AX foci及中性單細胞凝膠電泳結(jié)果顯示，衰老間充質(zhì)干細胞對BLM損傷更敏感，由BLM引起的損傷應(yīng)答能力降低，可能與基因基礎(chǔ)表達降低，應(yīng)激反應(yīng)滯后相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：干細胞 干細胞體外培養(yǎng)與分化 骨髓間充質(zhì)干細胞 衰老 DNA損傷修復(fù) 基因組穩(wěn)定性 腫瘤 氧化損傷 衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶 活性氧 單細胞凝膠電泳 γH2AX foci
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• Abstract5-7
• 摘要7-9
• 第一章 前言9-11
• 第二章 人骨髓間充質(zhì)干細胞衰老模型的建立11-25
• 2.1 材料與方法11-16
• 2.2 結(jié)果16-22
• 2.3 討論22-24
• 2.4 結(jié)論24-25
• 第三章 間充質(zhì)干細胞衰老過程中 H2O2介導(dǎo)的 DNA 損傷應(yīng)答特性的研究25-36
• 3.1 材料與方法25-29
• 3.2 結(jié)果29-34
• 3.3 討論34-35
• 3.4 結(jié)論35-36
• 第四章 間充質(zhì)干細胞衰老過程中 BLM 介導(dǎo)的 DNA 損傷應(yīng)答特性的研究36-48
• 4.1 材料與方法36-40
• 4.2 結(jié)果40-46
• 4.3 討論46-47
• 4.4 結(jié)論47-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻49-55
• 文獻綜述55-65
• 參考文獻61-65
• 攻讀碩士研究生期間撰寫及待發(fā)表的論文65-66
• 致謝66

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本文編號：417544