本文關(guān)鍵詞：果蠅中CD133同源基因prominin-like分子功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自從1997年CD133在小鼠神經(jīng)上皮細(xì)胞和人造血干細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)以來(lái),其作為多種細(xì)胞的表面分子標(biāo)記得到了廣泛的確認(rèn)和研究。CD133在各種干細(xì)胞,分化的細(xì)胞,和腫瘤細(xì)胞中都有表達(dá),尤其在多種組織的癌細(xì)胞中的廣泛表達(dá),使其成為癌癥治療的靶點(diǎn)研究對(duì)象。 CD133蛋白為多次跨膜的糖蛋白,特異性聚集分布在細(xì)胞膜上的微絨毛、纖毛、中間體等突出物上,并與膜上的脂筏相連。CD133蛋白可包含在膜囊泡中,釋放到各組織的體液內(nèi),但囊泡的作用尚不清楚。在小鼠和人的CD133突變體中會(huì)影響視覺(jué)系統(tǒng)的正常發(fā)育,造成視覺(jué)障礙。目前除了對(duì)此突變體表型有清晰的描述之外其他各方面關(guān)于CD133的研究大多集中在其與干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系上,但其是否只是一個(gè)廣泛的細(xì)胞表面分子標(biāo)記物,還是與腫瘤的產(chǎn)生有直接或間接的關(guān)系一直沒(méi)有得到確切的認(rèn)定,CD133的分子功能,具體參與的信號(hào)通路也尚未明確。 果蠅中存在兩個(gè)CD133的同源基因,prominin和prominin-like, prominin突變體表型已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),同小鼠和人體中類似,果蠅中prominin突變也是影響眼睛正常結(jié)構(gòu)的發(fā)育。目前對(duì)prominin-like的研究仍是空白,沒(méi)有其突變體表型和分子功能的相關(guān)報(bào)道,參與的生物過(guò)程更是未知。我們?cè)噲D通過(guò)構(gòu)建其突變體和制備相應(yīng)抗體來(lái)明確其表型并分析其分子功能,此外構(gòu)建其過(guò)表達(dá)載體來(lái)制備轉(zhuǎn)基因果蠅,以利用TAP/MS方法來(lái)尋找與prominin-like相互作用的蛋白,探尋其可能參與的信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：CD133 果蠅 prominin-like
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R384.2
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 縮寫(xiě)詞7-10
• 1 緒論10-15
• 1.1 模式生物果蠅10-11
• 1.2 CD13311-13
• 1.3 果蠅中CD133同源基因13-15
• 2 材料與方法15-33
• 2.1 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)15-23
• 2.1.1 DNA實(shí)驗(yàn)15-21
• 2.1.2 RNA實(shí)驗(yàn)21-23
• 2.2 果蠅實(shí)驗(yàn)23-26
• 2.2.1 果蠅的基本操作23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)中所用到的果蠅品系23-24
• 2.2.3 轉(zhuǎn)基因果蠅操作流程24-25
• 2.2.4 果蠅幼蟲(chóng)大腦/成蟲(chóng)盤(pán)/脂肪體解剖25
• 2.2.5 胚胎固定25-26
• 2.3 生化試驗(yàn)26-29
• 2.3.1 Western Blot26-27
• 2.3.2 免疫熒光染色27-29
• 2.4 Prominin-like兔抗血清的制備29-32
• 2.4.1 GST-prominin-like融合蛋白表達(dá)29
• 2.4.2 蛋白表達(dá)條件優(yōu)化29-30
• 2.4.3 蛋白大量表達(dá)30
• 2.4.4 融合蛋白純化30-31
• 2.4.5 抗體生產(chǎn)(兔免疫抗體)31-32
• 2.5 實(shí)驗(yàn)中所用溶液32-33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-48
• 3.1 Prominin-like基因的表達(dá)模式33-35
• 3.2 Prominin-like基因的組織特異性功能敲低35-37
• 3.3 Prominin-like基因的過(guò)表達(dá)37-38
• 3.4 Prominin-like突變體構(gòu)建38-45
• 3.4.1 Minos轉(zhuǎn)座子基因敲除法38-40
• 3.4.2 TALEN和CRISPR/Cas9基因敲除法40-42
• 3.4.3 FLP-FRT重組法42-45
• 3.5 Prominin-like突變體表型及功能分析45-48
• 4 討論48-50
• 4.1 prominin-like與果蠅繁殖能力48
• 4.2 prominin-like與脂肪體組織的發(fā)育48
• 4.3 prominin-like與細(xì)胞自噬48-49
• 4.4 prominin-like與神經(jīng)干細(xì)胞49
• 4.5 prominin-like參與的信號(hào)通路49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Efficient and Specific Modifications of the Drosophila Genome by Means of an Easy TALEN Strategy[J];遺傳學(xué)報(bào);2012年05期

  本文關(guān)鍵詞：果蠅中CD133同源基因prominin-like分子功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：414173