本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）中藥單體抑制劑的抗菌作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 雙組份系統(tǒng)VicR/VicK是肺炎鏈球菌中唯一一個與細(xì)菌生存相關(guān)的TCS系統(tǒng),調(diào)控著維持細(xì)胞壁穩(wěn)態(tài)的基因表達(dá)，而且調(diào)節(jié)細(xì)菌對抗生素的耐藥性。其中VicK為含449個氨基酸的組氨酸激酶受體，負(fù)責(zé)接收外界信號刺激并將信號傳遞給VicR，被認(rèn)為是篩選抗菌藥物的良好作用靶點。 目前已有多篇以VicK為靶點篩選抗菌藥物的文章報道，本課題組以前也以該靶點篩選出6個具有抗肺炎鏈球菌作用的小分子化合物。而中藥單體作為我國傳統(tǒng)藥物，來源廣泛且副作用小，是很好的抗菌藥物篩選庫，實驗室前期以肺炎鏈球菌VicK為靶點通過計算機虛擬篩選獲得96種中藥單體，本研究將對這些化合物的抗菌作用進(jìn)行體內(nèi)外驗證，同時對其相關(guān)作用機制進(jìn)行初步研究。 方法 通過原核表達(dá)技術(shù)從大腸桿菌中表達(dá)S.pn VicK全長蛋白，經(jīng)Western blot分析VicK在6種不同血清型肺炎鏈球菌中的保守性并通過試劑盒檢測其激酶活性。然后利用具有活性的VicK蛋白對化合物進(jìn)行體外篩選，，以抑制VicK蛋白激酶活性的化合物進(jìn)行隨后的抑菌實驗。采用最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）評估化合物的體外抗菌，利用細(xì)胞毒性試驗評價其細(xì)胞毒性，采用小鼠S.pn鼻咽部定植模型和敗血癥模型評估化合物體內(nèi)抗菌作用，分別以感染部位細(xì)菌載量和生存率為評價指標(biāo)。采用微量棋盤稀釋法檢測其與傳統(tǒng)抗菌藥是否具有協(xié)同效應(yīng)，并從細(xì)菌形態(tài)變化和生物膜形成的角度初步探索其抗菌的機制。 結(jié)果 試驗中的5種中藥單體化合物為：甲硫腺苷、octanal2,4-dinitrophenylhydrazone、去氧紫草素、麻醉椒苦素、沒食子酸月桂酯，其對VicK的ATPase酶活性具有顯著的抑制效應(yīng)，抑制率均大于50%。體外抑菌作用結(jié)果顯示，這5中化合物對肺炎鏈球菌的MIC分別為37.1,38.5,17,68.5, and21μg/mL，而體內(nèi)抗菌實驗結(jié)果顯示，5種化合物均能顯著延長感染小鼠的生存時間。同時這5種化合物對耐藥性肺炎鏈球菌、變形鏈球菌、緩癥鏈球菌、化膿鏈球菌假肺炎均具有抗菌作用，其中去氧紫草素和沒食子酸月桂酯對MRSA也有顯著抗菌作用�？咕鷻C制研究實驗結(jié)果顯示，在sub-MIC下，5種化合物都能抑制細(xì)菌細(xì)胞分裂和生物膜的形成。傳統(tǒng)抗菌藥增效實驗結(jié)果顯示，去氧紫草素和沒食子酸月桂酯與青霉素、紅霉素和四環(huán)素都有協(xié)同作用，能夠降低耐藥型19F、19AS.pn在鼻咽部和肺部的定植。細(xì)胞毒性試驗顯示5種化合物的細(xì)胞毒性較低。 結(jié)論 5種中藥單體化合物為VicK蛋白抑制劑，具有顯著的體內(nèi)外抗鏈球菌的活性，且對青霉素、紅霉素和四環(huán)素都有一定的增效作用，為新的具有一定廣譜性的抗菌先導(dǎo)化合物，在治療鏈球菌感染特別是耐藥性鏈球菌感染中有一定的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：肺炎鏈球菌 中藥單體 抗菌作用 VicK組氨酸激酶
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R378.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 肺炎鏈球菌組氨酸激酶 VicK 蛋白的全長表達(dá)及其保守性分析15-24
• 1 實驗材料15-16
• 2 實驗方法16-18
• 3 實驗結(jié)果18-22
• 4 討論22-24
• 第二部分 中藥單體對 VicK 蛋白激酶活性的抑制作用及抗菌作用驗證24-32
• 1 實驗材料24-25
• 2 實驗方法25-26
• 3 實驗結(jié)果26-30
• 4 討論30-32
• 第三部分 VicK 抑制劑的抗菌機制及對傳統(tǒng)抗菌藥的增效作用研究32-42
• 1 實驗材料32-33
• 2 實驗方法33-34
• 3 實驗結(jié)果34-40
• 4 討論40-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 文獻(xiàn)綜述46-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文題錄55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 佘婷婷;徐元宏;;肺炎鏈球菌耐藥性及其耐藥機制研究[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);2011年01期

2 郝艷華;張維;陳明;;細(xì)菌雙組分系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報;2012年02期

3 楊永弘,陸權(quán),鄧力,沈敘莊,張泓,周宏,胡翼云,俞桑潔,張國成;四地兒童肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌抗生素敏感性監(jiān)測(2000～2001年)[J];中華兒科雜志;2002年08期

4 陳曉輝,魏衍超,溫得良,熊旭明,劉衛(wèi)江,羅輝遇,謝長江;危重病監(jiān)護(hù)病房的細(xì)菌耐藥監(jiān)測及分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2005年08期

5 楊平滿;周建英;;常見多重耐藥菌的耐藥機制及防治對策[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2006年12期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱濤;表皮葡萄球菌雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)LytS/R和SrrB/A調(diào)控功能的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）中藥單體抑制劑的抗菌作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：413234