本文關(guān)鍵詞：鼠疫耶爾森菌Pla毒力蛋白的表達(dá)、純化及其活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備鼠疫耶爾森菌(Yersinia pestis)重組纖溶酶原激活劑(Pla)蛋白,為研究鼠疫菌蛋白之間相互作用和鼠疫的免疫學(xué)診斷奠定基礎(chǔ)。方法應(yīng)用PCR從鼠疫菌基因組中擴(kuò)增pla基因,將其克隆到p ET28a表達(dá)載體中;轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá);SDS-PAGE電泳檢測表達(dá)結(jié)果;應(yīng)用8 mol/L尿素將包涵體變性,梯度稀釋透析法將其復(fù)性,SDS-PAGE電泳和Western印跡檢測目的蛋白;奶粉平板法檢測纖溶酶原激活劑活性。結(jié)果與結(jié)論瓊脂糖凝膠電泳和測序結(jié)果證明表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功;SDS-PAGE電泳結(jié)果表明Pla蛋白以包涵體形式表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物主要為目的蛋白,且目的蛋白的表達(dá)量較高;包涵體經(jīng)變性、復(fù)性得到了電泳純Pla蛋白,并具有纖溶酶原激活劑活性。該研究提供了一種簡單、快速、高效制備具有活性的Pla蛋白的方法。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 鼠疫耶爾森菌 纖維蛋白酶原激活劑 表達(dá) 純化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31430006,81171529) 國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃資助項目(2014CB744405)
【分類號】：R378
【正文快照】： 鼠疫耶爾森菌(Yersinia pestis,簡稱鼠疫菌)是引起鼠疫的病原體。近年來,世界鼠疫疫情呈上升趨勢,2000年世界衛(wèi)生組織將鼠疫列為重新抬頭的傳染病[1]。同時,鼠疫菌又是一種標(biāo)準(zhǔn)的生物戰(zhàn)劑和生物恐怖劑,是未來生物戰(zhàn)或生物恐怖最有可能使用的生物戰(zhàn)劑之一。鼠疫菌是在6000~10 0

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 杜春紅;王鵬;張建中;肖迪;石麗媛;唐雪;宋志忠;;鼠疫耶爾森氏菌Pla蛋白的分離純化與質(zhì)譜分析[J];中國地方病防治雜志;2011年03期

2 杜春紅;王鵬;張建中;唐雪;宋志忠;;鼠疫耶爾森氏菌Pla蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年09期

3 石麗媛;楊光璨;董珊珊;于國林;;SDS-PAGE制備凝膠純化鼠疫菌Pla蛋白[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2008年12期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 杜春紅;王鵬;張建中;肖迪;石麗媛;唐雪;宋志忠;;鼠疫耶爾森氏菌Pla蛋白的分離純化與質(zhì)譜分析[J];中國地方病防治雜志;2011年03期

2 杜春紅;馬順高;畢佳訓(xùn);唐雪;尹家祥;王鵬;宋志忠;;雜交瘤細(xì)胞(10株)染色體形態(tài)、數(shù)目與抗體分泌的關(guān)系[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年04期

3 陳勇;李萍;張予超;雷清;蔣琳;;聚丙烯酰胺凝膠電泳分離惡性瘧原蟲pfs25膜蛋白的免疫原性研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2013年07期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 范釗;H9N2禽流感病毒核蛋白NP單克隆抗體的制備與鑒定[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 屈婭榮;尿路致病性大腸桿菌外膜蛋白T的致病機(jī)理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 程冬梅,鄧志勇,郭靄光;SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳快速染色新方法的研究[J];西北植物學(xué)報;2001年06期

2 宋志忠,тюменпеваи.с,АфанасцевЕ.Н,楊桂榮;鼠疫菌種特異性抗原[J];中國地方病防治雜志;1999年03期

3 石麗媛;楊光璨;董珊珊;于國林;;高效液相色譜分離純化鼠疫菌Pla蛋白[J];中國地方病防治雜志;2009年02期

4 李榮貴;趙峰;楊宏;杜桂彩;汪靖超;王斌;;重組沙蠶溶栓活性蛋白酶的純化及其性質(zhì)研究[J];中國海洋藥物;2007年02期

5 陳鵬;孫群;;不經(jīng)染色直接從SDS-PAGE制備凝膠中準(zhǔn)確切下所需蛋白條帶的方法[J];生物學(xué)通報;2006年03期

6 杜春紅;陳平;鐘佑宏;尹家祥;于國林;;金標(biāo)法進(jìn)行鼠疫F1McAb亞類的鑒定[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年03期

7 石麗媛;楊光璨;董珊珊;于國林;;SDS-PAGE制備凝膠純化鼠疫菌Pla蛋白[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2008年12期

8 武金霞,趙曉瑜;酪蛋白平板法檢測蚯蚓纖溶酶活性[J];自然雜志;2004年03期

9 陳光明;余為一;劉玉華;;羥基磷灰石純化NDV-HN基因核酸疫苗效果觀察[J];中國獸醫(yī)雜志;2007年08期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭惠;楊晉川;張雷;陳勇;劉金芳;許靜靜;丁韌;王璐梅;;徐州地區(qū)小腸結(jié)腸耶爾森菌的分布特征[J];中國人獸共患病學(xué)報;2008年10期

2 王紅婭;劉月淑;王玲;王翠蘭;徐錫;張桂芳;;耶爾森菌選擇培養(yǎng)基在鼠疫耶爾森菌分離培養(yǎng)中的應(yīng)用[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

3 錢月貞;耶爾森菌病1例報告[J];臨床薈萃;1999年16期

4 黃海,馬文麗,鄭文嶺;鼠疫耶爾森菌基因組研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2003年02期

5 鐘天然,丁振若;新生兒耶爾森菌腸炎1例[J];陜西新醫(yī)藥;1986年01期

6 周冬生,韓延平,宋亞軍,童宗中,裴德翠,戴二黑,張玲,包靜月,李敏,崔百忠,張秀清,王津,郭兆彪,祁芝珍,金麗霞,翟俊輝,杜宗敏,王效義,汪建,黃培堂,楊瑞馥;鼠疫耶爾森菌基因組進(jìn)化與生態(tài)位適應(yīng)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2004年03期

7 何電;董興齊;;鼠疫耶爾森菌質(zhì)粒的種類及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國媒介生物學(xué)及控制雜志;2008年04期

8 胡靜;;致病性耶爾森菌強(qiáng)毒力島的結(jié)構(gòu)和功能研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2002年01期

9 周偉;;鼠疫耶爾森氏菌研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2006年12期

10 劉義;王艷玲;;小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的致病及檢測研究進(jìn)展[J];環(huán)境與健康雜志;2008年08期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 江凌曉;;鼠疫耶爾森菌外膜蛋白研究進(jìn)展[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

2 江凌曉;;鼠疫耶爾森菌外膜蛋白研究進(jìn)展[A];新世紀(jì)預(yù)防醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)——中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會首屆學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2002年

3 徐興強(qiáng);陳學(xué)軍;程永樟;曾永勝;;三種方法分離培養(yǎng)糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的比較[A];2004年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王津生;炭疽、天花和鼠疫[N];大眾科技報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉穎;人類糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢測方法的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

2 江凌曉;應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)分析鼠疫耶爾森菌致病相關(guān)蛋白抗體表達(dá)譜的實驗研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 胡靜;EAggEC攜帶的耶爾森菌HPI毒力的功能研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王鑫;中國小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分子流行病學(xué)研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2009年

2 孫文魁;小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性和分子分型研究[D];山東大學(xué);2013年

3 李可維;致病性耶爾森菌外膜蛋白A基因多態(tài)性研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

4 羅敏紅;建立環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法檢測腹瀉患者中的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

5 王增國;我國部分地區(qū)攜帶ystB基因小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的分子流行病學(xué)研究[D];江蘇大學(xué);2008年

6 梁俊容;中國小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在生豬中的分布及傳播方式的研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2012年

7 古文鵬;致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物血清型1B/O:8和2/O:9不同溫度培養(yǎng)條件下相關(guān)抗原和蛋白質(zhì)組學(xué)比較研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2011年

  本文關(guān)鍵詞：鼠疫耶爾森菌Pla毒力蛋白的表達(dá)、純化及其活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：412693