本文關(guān)鍵詞：基于巨噬細(xì)胞極化表型的磷酸化分子群篩選與功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：巨噬細(xì)胞是體內(nèi)固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,是抵御外界病原微生物的第一道防線。當(dāng)病原微生物入侵機(jī)體時(shí),首先由巨噬細(xì)胞識(shí)別并清除,維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。同時(shí),病原微生物可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化,活化的巨噬細(xì)胞釋放一系列促炎因子、氧和氮自由基,這使得它們成為體內(nèi)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)者和宿主防御的重要組成部分。 在巨噬細(xì)胞活化過程中會(huì)發(fā)生明顯的形態(tài)改變,細(xì)胞骨架重排,誘導(dǎo)板狀偽足、絲狀偽足、細(xì)胞膜皺褶出現(xiàn),形成一個(gè)大圓餅狀。這種形態(tài)改變稱為巨噬細(xì)胞的極化,是其活化的標(biāo)志。 巨噬細(xì)胞活化與炎癥關(guān)系密切,傳統(tǒng)方法研究巨噬細(xì)胞是定點(diǎn)、單一的檢測其活化功能改變,不能反映巨噬細(xì)胞活化的整體生物學(xué)效應(yīng)。因此,亟需建立一個(gè)能模擬內(nèi)環(huán)境條件下巨噬細(xì)胞活化的系統(tǒng),在更接近生理狀態(tài)下研究巨噬細(xì)胞功能。 本項(xiàng)研究中,我們基于巨噬細(xì)胞活化時(shí)發(fā)生極化的特性,利用微電子芯片技術(shù)在體外建立一個(gè)時(shí)間、劑量依賴細(xì)胞反應(yīng)圖譜(Time-and dose-dependent cell response profiles, TCRPs)檢測巨噬細(xì)胞極化。TCRPs的優(yōu)勢在于可以動(dòng)態(tài)、無標(biāo)簽、高通量研究巨噬細(xì)胞極化生物功能改變。 我們研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ/LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化在TCRPs上有特征性的圖譜,并用傳統(tǒng)方法證實(shí)巨噬細(xì)胞極化是由巨噬細(xì)胞活化導(dǎo)致的,巨噬細(xì)胞極化與骨架重排相關(guān)。在此基礎(chǔ)上,TCRPs證實(shí)轉(zhuǎn)化生長因子β (Transforming growth factor-β,TGF-β),一個(gè)已知的巨噬細(xì)胞活化抑制劑,能抑制巨噬細(xì)胞極化,說明TCRPs相關(guān)巨噬細(xì)胞極化可作為巨噬細(xì)胞活化模型。接著,我們檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架相關(guān)抑制劑,秋水仙素而不是細(xì)胞色素D,能抑制TCRPs相關(guān)巨噬細(xì)胞極化。再者,利用TCRPs高通量、大規(guī)模篩選的優(yōu)勢,我們對一個(gè)包括160多種磷酸酶和磷酸激酶抑制劑文庫進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)已知的巨噬細(xì)胞活化抑制劑Lck抑制劑虎刺醛,能抑制TCRPs相關(guān)巨噬細(xì)胞極化,同時(shí),虎刺醛能抑制巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子和骨架重排,進(jìn)一步說明TCRPs相關(guān)巨噬細(xì)胞極化模型有效性。更有趣的是,本研究首次發(fā)現(xiàn)酪氨酸磷酸酶shp2抑制劑PHPS1能抑制TCRPs相關(guān)巨噬細(xì)胞極化,進(jìn)而在體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)PHPS1可改善小鼠急性肺損傷(Acute lung injury,ALI),巨噬細(xì)胞條件性敲除shp2小鼠也證實(shí)了此作用,巨噬細(xì)胞活化是導(dǎo)致炎癥的重要病因,靶向作用shp2抑制巨噬細(xì)胞活化可能成為治療炎癥的新方法。 總之,本課題建立一種新型的、更接近生理狀態(tài)條件下的巨噬細(xì)胞極化特征性TCRPs圖譜。這對更好的分析巨噬細(xì)胞極化功能改變、相關(guān)信號(hào)通路和藥物篩選提供了強(qiáng)有力的研究手段。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞極化 TCRPs 骨架重排 磷酸激酶 磷酸酶
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文縮略詞表10-11
• 目次11-12
• 1 引言12-16
• 2 材料與試劑16-21
• 3 試驗(yàn)方法21-30
• 4 結(jié)果30-46
• 5 討論46-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 綜述54-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 作者簡歷及在讀期間取得的科研成果65

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  本文關(guān)鍵詞：基于巨噬細(xì)胞極化表型的磷酸化分子群篩選與功能鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：410861