本文關(guān)鍵詞：蛋氨酸—膽堿缺乏飲食誘導(dǎo)非酒精性單純性脂肪肝小鼠模型建立與益生菌治療的動態(tài)觀察，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[研究目的]非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)在我國是高患病率的慢性肝臟疾病,發(fā)病率逐年上升。NAFLD的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚,目前認(rèn)為是一種與胰島素抵抗(insulin resistance, IR)和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷。NAFLD疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)以及肝硬化,并最終可進(jìn)展為肝細(xì)胞癌。因此,盡早的對NAFLD進(jìn)行干預(yù)是改善患者預(yù)后的重要手段,而目前尚無有充足循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的藥物治療手段。并且,因其作為金標(biāo)準(zhǔn)的病理學(xué)診斷存在創(chuàng)傷,該疾病的目前診斷主要依賴臨床診斷,診斷的準(zhǔn)確性和敏感性仍有待提高,尤其非酒精性單純性脂肪肝因其發(fā)病隱匿、癥狀不典型,因而發(fā)現(xiàn)較為困難。因此,建立合適的動物模型模型對于研究非酒精性單純性脂肪肝疾病的規(guī)律、改善診斷和治療手段的意義重大。 [研究方法]研究分為兩個部分。第一部分：1、根據(jù)隨機(jī)分組的原則,24只小鼠隨機(jī)分入觀察組(n=12)和正常對照組(n=12)；2、觀察組小鼠給予蛋氨酸-膽堿缺乏飲食(MCDD)飼養(yǎng)3周,對照組給予正常飲食；3、動態(tài)觀察小鼠的一般情況,定期稱取體重、留取新鮮糞便標(biāo)本進(jìn)行四種細(xì)菌屬的培養(yǎng)(包括大腸桿菌、糞腸球菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌)；4、分別于第8、15、22d處死小鼠,處死后采集血清標(biāo)本和肝臟標(biāo)本；5、血清標(biāo)本用于檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯(TG),并采用酶聯(lián)免疫法檢測腫瘤壞死因子a(TNF-a)、白介素-6(IL-6)以及脂多糖(LPS)水平。第二部分：1、對32只上述2周模型小鼠再次進(jìn)行隨機(jī)分組,分為藥物治療組(D組,n=16)和飲食恢復(fù)組(B組,n=16),并按1：2設(shè)立正常對照同周齡小鼠8只(C組,n=8)；2、對藥物治療組小鼠每日兩次經(jīng)胃管給予培菲康治療,時間共計6周；3、動態(tài)觀察小鼠的一般情況,定期稱重、進(jìn)行糞便細(xì)菌培養(yǎng)；4、于第43天處死小鼠,處死后采集血清標(biāo)本和肝臟標(biāo)本；5、所得肝臟標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)診斷并進(jìn)行評分量化；6、對所采集血清標(biāo)本進(jìn)行ALT、AST、TG、TNF-a、 IL-6、LPS檢測；7、上述結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn),組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn),干預(yù)治療效果比較采用單因素方差分析,均以P0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。 [結(jié)果] 第一部分： .、經(jīng)MCD飲食誘導(dǎo),小鼠出現(xiàn)精神萎靡、毛發(fā)紊亂等現(xiàn)象,病理分析明確從第8d起小鼠肝臟內(nèi)即出現(xiàn)肝脂肪性變,而8d、15d時間節(jié)點(diǎn)小鼠的肝臟病理NAS評分均在3-4分間,與22d(5分)、正常對照組(O分)有差異,提示MCD誘導(dǎo)2周即可出現(xiàn)穩(wěn)定NAFL小鼠模型,并且病變階段控制在NAFL階段。 2、MCDD模型小鼠與對照組小鼠相比體重從第4天起下降明顯(P=0.02),并出現(xiàn)毛發(fā)紊亂、精神萎靡等一般情況的改變；糞便細(xì)菌培養(yǎng)提示了隨著MCDD造模時間的延長,模型組小鼠相對正常對照組小鼠逐漸出現(xiàn)了腸道菌群的紊亂。 3、血清中ALT、AST水平隨造模時間的延長,均數(shù)呈上升趨勢,但各時間節(jié)點(diǎn)與對照組相比均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異；TG的水平也隨時間變化呈現(xiàn)增長趨勢,且各時間節(jié)點(diǎn)均與正常對照組呈顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 4、血清TNF-a、IL-6、LPS水平造模組小鼠和對照組小鼠在各時間節(jié)點(diǎn)均表現(xiàn)出了差異。造模組小鼠血清TNF-a、LPS水平各時間節(jié)點(diǎn)均有顯著差異,且與造模時間呈明顯正相關(guān)關(guān)系。 5、在P0.05的水平,TNF-a、IL-6、LPS、ALT均與病理學(xué)評分呈正相關(guān)關(guān)系,其中TNF-a、IL-6、LPS相關(guān)關(guān)系極強(qiáng)(r=0.843,0.839,0.884),ALT與病理評分關(guān)系中等(r=0.574)；腸道細(xì)菌培養(yǎng)的B/E值與病理學(xué)評分呈負(fù)相關(guān),關(guān)系比較強(qiáng)(r=-0.662) 第二部分： .、干預(yù)治療組(D組)小鼠一般情況恢復(fù)明顯優(yōu)于恢復(fù)飲食組(B組),B組死亡率達(dá)31.25%,其中三只死亡原因考慮為感染、兩只死亡原因不明。體重兩組均在3周內(nèi)恢復(fù)至正常,D組稍快,但兩組比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 2、D組腸道菌群紊亂恢復(fù)明顯,第11天B/E值即與正常組無顯著差異(P=P=0.02),且保持相對穩(wěn)定。僅通過飲食恢復(fù),B組腸道菌群紊亂不能得到糾正。 3、B組小鼠肝臟脂肪性病變?nèi)匀幻黠@,且小葉內(nèi)炎癥明顯加重；D組小鼠脂肪性病變程度隨時間延長有所下降,小葉內(nèi)炎癥幾乎未見加重。干預(yù)治療使D組病理表現(xiàn)有所改觀,與B組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.032) 4、相關(guān)性分析顯示代表腸道定植力的B/E值與病理評分在P=0.05水平上呈中等強(qiáng)度的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.526),而乳酸桿菌與糞腸球菌均與病理評分在P=0.01水平上呈較強(qiáng)強(qiáng)度的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.648,-0.632)。提示了腸道菌群的異常和NAFLD的病變程度之間的相關(guān)性。 5、干預(yù)治療后D組小鼠TNF-a、IL-6、LPS水平均與干預(yù)治療前相比有所下降,而B組IL-6水平較前有所下降,TNF-a、LPS水平與干預(yù)前相比反而升高,干預(yù)對兩組TNF-a、IL-6、LPS水平的影響均表現(xiàn)出了顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.012,0.004,0、026)。而干預(yù)后D組小鼠表達(dá)水平與同周齡的正常對照組小鼠比較仍有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 6、干預(yù)治療后B組小鼠ALT、AST、TG水平均與干預(yù)治療前相比略有升高,而D組小鼠均與干預(yù)前相比下降明顯,干預(yù)效果兩組表現(xiàn)出了顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.056,0.013,0、007)。 [結(jié)論]MCD飲食誘導(dǎo)2周可形成穩(wěn)定的NAFL動物模型,該動物模型出現(xiàn)顯著的血脂及炎性因子、內(nèi)毒素水平升高,升高程度與病變程度關(guān)系明顯,肝酶關(guān)系不明顯。NAFLD動物模型存在明確腸道菌群紊亂,補(bǔ)充培菲康干預(yù)治療可有效糾正,僅恢復(fù)飲食治療不能改善。藥物干預(yù)治療可改善疾病的發(fā)展以及動物的預(yù)后情況,改善肝臟病變,有效降低炎性細(xì)胞因子及內(nèi)毒素水平,并表現(xiàn)出肝酶及甘油三酯水平下降。腸道菌群的異常和疾病病變程度相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 非酒精性單純性脂肪肝 蛋氨酸-膽堿缺乏 胰島素抵抗 腸道菌群紊亂 炎性因子
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R575.5
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮略詞表12-14
• 前言14-17
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 第一部分 MCD飲食誘導(dǎo)NAFLD小鼠模型建立及動態(tài)觀察17-37
• 一、對象與方法18-22
• 二、結(jié)果22-29
• 三、討論29-33
• 四、結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 第二部分 調(diào)節(jié)NAFLD小鼠腸道微生態(tài)治療探討37-54
• 一、對象與方法38-41
• 二、結(jié)果41-49
• 三、討論49-51
• 四、結(jié)論51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 碩士在讀期間科研成果64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：404597