目的建立一種簡便、高效的人可溶性CD105(soluble CD105,sCD105)蛋白的真核表達(dá)及純化方法。方法人工合成胞外區(qū)和信號肽區(qū)域的DNA片段,在其信號肽前端加入Kozak sequence(GCACCATGG)序列,促進(jìn)蛋白表達(dá),同時在其C-末端6×His前加入K(AAG)氨基酸,促進(jìn)6×His的暴露有助于后期純化,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3. 4-sCD105。通過瞬時轉(zhuǎn)染的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293F懸浮細(xì)胞,收集細(xì)胞上清液,利用His-trap EXCEL柱通過兩步純化法進(jìn)行純化。將純化獲得的sCD105蛋白超濾濃縮后,進(jìn)行10%SDS-PAGE、Western blot及ELISA檢測。結(jié)果在20 mL(1×10～6個/mL)293F懸浮細(xì)胞中表達(dá)及純化后,獲得純度> 95%的sCD105蛋白3 mL,濃度為27. 83 mg/L,獲得率高達(dá)4. 17 mg/L。結(jié)論成功建立了一種簡便高效的sCD105蛋白表達(dá)及純化的方法,為后期蛋白功能的研究及相應(yīng)治療或診斷性抗體的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.4 質(zhì)粒的大量提取
    1.5 293F細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
    1.6 蛋白的純化
    1.7 蛋白含量的檢測
    1.8 蛋白的鑒定
2 結(jié)果
    2.1 真核表達(dá)載體的鑒定
    2.2 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞活性
    2.3 s CD105蛋白兩步純化產(chǎn)物的鑒定
    2.4 濃縮后的s CD105蛋白的鑒定
3 討論



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