本文關(guān)鍵詞：幽門(mén)螺桿菌臨床株cagA基因克隆及序列分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分離鑒定臨床分離株幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp),分析其CagA蛋白的磷酸化基序EPIYA,探討東亞株Hp CagA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。方法選取胃相關(guān)疾病患者的胃黏膜組織,剪碎后接種于哥倫比亞血瓊脂平板,微需氧培養(yǎng),菌落生長(zhǎng)后通過(guò)尿素酶試驗(yàn)、革蘭染色及顯微鏡檢查對(duì)Hp進(jìn)行初步鑒定。提取菌落基因組,PCR擴(kuò)增Hp 16SrRNA基因并進(jìn)行測(cè)序鑒定;擴(kuò)增cagA基因全長(zhǎng)序列,連接入pMD18-T載體。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)E.coli DH5α,測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒,利用DNAStar和MEGA 6軟件對(duì)cagA序列進(jìn)行比對(duì)及聚類(lèi)分析。結(jié)果成功分離Hp共26株。構(gòu)建pMD18-T/cagA克隆載體后對(duì)26株Hp的cagA基因全長(zhǎng)測(cè)序,序列比對(duì)分析顯示有6株為西方型,20株為東亞型。東亞型CagA第815~834位點(diǎn)存在13個(gè)氨基酸的缺失、部分缺失或變異,西方型中有3株丟失磷酸化位點(diǎn)EPIYA-C;聚類(lèi)分析顯示Hp分離株分別聚類(lèi)為東亞群、西方型東亞群以及西方群3群。結(jié)論 Hp分離株以東亞株為主,但也存在西方株感染;東、西方型CagA在EPIYA基序及側(cè)翼序列顯著差異,菌株之間存在聚類(lèi)關(guān)系。
【作者單位】： 貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物教研室;
【關(guān)鍵詞】： 幽門(mén)螺桿菌 CagA蛋白 EPIYA基序 聚類(lèi)分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81260303) 貴州省2011協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(黔教合協(xié)同創(chuàng)新中心[2014]06) 貴州省科技攻關(guān)計(jì)劃基金項(xiàng)目(黔科合SY字[2011]3067號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： ***幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是一種螺桿狀革蘭陰性微需氧菌,具有高變異性和顯著的地域流行差異,長(zhǎng)期定植于人類(lèi)胃腸道,是慢性胃炎、胃潰瘍的主要致病因素之一,與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1-3]。CagA(cytotoxin associated protein A)是目前已知的唯一能被Hp注入胃上

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本文編號(hào)：401655