發(fā)布時間：2017-05-27 03:02

  本文關(guān)鍵詞：抗FKBP52人源單鏈抗體的篩選及其完整抗體真核表達載體的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:從大容量天然噬菌體抗體庫中篩選抗FKBP52人源單鏈抗體,并進一步構(gòu)建其真核表達載體。方法:以FKBP52為抗原,通過吸附、擴增、洗脫等過程,從大容量天然噬菌體抗體庫中篩選特異性單鏈抗體,采用ELISA方法進行特異性測定,采用生物膜干涉方法測定親和力,再經(jīng)同源重組方法構(gòu)建完整抗體的真核表達載體,通過PCR及序列測定對構(gòu)建的載體進行驗證。結(jié)果:經(jīng)過4輪篩選,獲得15種與FKBP52特異結(jié)合的噬菌體抗體,其中7種得到可溶性表達;序列分析表明,7種單鏈抗體重鏈可變區(qū)分屬VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亞群,輕鏈可變區(qū)分屬VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亞群;特異性結(jié)合活性較好的4株抗體的親和常數(shù)分別為9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;將親和力較好的一株單鏈抗體輕、重鏈可變區(qū)基因分別拼接到含有人κ及Ig G1恒定區(qū)基因的p CMV-L和p CMV-H真核表達載體中。結(jié)論:篩選獲得多株人源抗FKBP52單鏈抗體,并構(gòu)建了完整抗體的真核表達載體。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學第三臨床醫(yī)學院;海軍總醫(yī)院中心實驗科;
【關(guān)鍵詞】： FKBP 噬菌體抗體庫 單鏈抗體 真核表達載體
【基金】：國家自然科學基金(81273311,81172119)
【分類號】：R392.11;Q78
【正文快照】： FKBP52)屬于免疫抑制劑FK506結(jié)合蛋白(FKBP)家族,主要存在于細胞核內(nèi),也有一部分存在于胞質(zhì)中。FKBP52由459個氨基酸殘基組成,其編碼基因FKBP4定位于染色體12p13.33,全長10 482 bp。已知FKBP52在調(diào)控甾體激素受體信號通路及中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元微管功能中發(fā)揮重要作用[1]。研究

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