發(fā)布時(shí)間：2017-05-27 00:14

  本文關(guān)鍵詞：Apelin促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的作用機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）可呈現(xiàn)分化型和增殖型兩種表型，這兩種表型間的相互轉(zhuǎn)化是引起血管重塑性疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化、血管再狹窄等血管增殖性疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)。孤兒G蛋白偶聯(lián)受體APJ和它的內(nèi)源性配體apelin（apelin/APJ系統(tǒng)）在心血管系統(tǒng)中具有降低血壓、增強(qiáng)心肌收縮的作用，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有調(diào)節(jié)垂體激素釋放、調(diào)節(jié)攝食、攝水、體液平衡等作用。近年發(fā)現(xiàn)，apelin還具有促進(jìn)新生血管生成的作用。在新生血管形成中，內(nèi)皮細(xì)胞中的apelin和APJ的表達(dá)受時(shí)序調(diào)控。體外實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，apelin/APJ系統(tǒng)通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和形成索狀構(gòu)造來(lái)調(diào)節(jié)新生血管形成。此外，apelin還具有穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞之間相互連接的作用。遺傳工程小鼠模型也表明，，在生理和病理血管形成過(guò)程中，apelin/APJ調(diào)節(jié)新生血管的成熟和穩(wěn)定。Apelin蛋白前體含有77個(gè)氨基酸，多肽鏈中含有多個(gè)成對(duì)的堿性氨基酸殘基（Arg-Arg或Arg-Lys）。在體內(nèi)apelin可被內(nèi)肽酶剪切成多種含有C末端片段的產(chǎn)物，包括apelin-13，apelin-17及apelin-36，apelin-36是其主要的存在形式。這些apelin亞型都是APJ的配體，與APJ結(jié)合后產(chǎn)生不同的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)，比較短的apelin肽鏈對(duì)APJ更有親和力，因此，apelin-13比其他亞型多肽表現(xiàn)出更強(qiáng)的生物學(xué)活性�；趯�(duì)apelin/APJ系統(tǒng)促進(jìn)新生血管形成是否與促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖和遷移有關(guān)目前尚不清楚，本研究觀察apelin-13對(duì)VSMC遷移和增殖的影響，并探討其作用機(jī)制。 方法：用貼塊法分離、培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈VSMC，Western blot分析檢測(cè)mmp-2、NF-κB、cyclin D1、cyclin E1等基因的表達(dá)，cck-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VSMC遷移能力，鬼比環(huán)肽染色觀察細(xì)胞形態(tài)和應(yīng)力纖維的變化。 結(jié)果: 1Apelin-13促進(jìn)VSMC增殖和遷移 用0、0.1、0.5、1μM apelin-13分別刺激VSMC24h后，加入cck-8試劑孵育2h，在酶標(biāo)儀450nm處讀取O.D值。結(jié)果顯示，apelin-13可以誘導(dǎo)VSMC增殖，且隨著濃度升高，促增殖效果逐漸增強(qiáng)。 在傷口愈合實(shí)驗(yàn)中，用0.1μM apelin-13刺激VSMC24h后，進(jìn)行HE染色，顯微鏡下可觀察到apelin-13刺激顯著促進(jìn)VSMC遷移。 2Apelin-13誘導(dǎo)cyclin D1、cyclin E1、NF-κB和mmp-2表達(dá) Western blot分析結(jié)果顯示，分別用0、0.1、0.5、1μM apelin-13刺激VSMC24h后，與對(duì)照組相比， apelin-13刺激使cyclin D1、cyclin E1、NF-κB、mmp-2表達(dá)明顯升高。 用0.1μM apelin-13分別刺激VSMC0、6、12、24h后，cyclin D1、NF-κB、mmp-2表達(dá)隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸上調(diào)。以上結(jié)果表明，apelin-13可劑量和時(shí)間依賴性的誘導(dǎo)增殖相關(guān)基因表達(dá)。 3Apelin-13抑制VSMC分化 用0.1μM apelin-13刺激VSMC24h后，分別檢查VSMC分化標(biāo)志基因SM22α、α-actin的表達(dá)和細(xì)胞骨架形態(tài)變化。結(jié)果表明，給予apelin-13刺激后，SM22α和α-actin的表達(dá)下調(diào)。鬼筆環(huán)肽染色顯示，apelin-13刺激后，VSMC形態(tài)由長(zhǎng)梭形轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘟切�，�?xì)胞骨架不規(guī)則，肌絲顯著減少。以上結(jié)果表明，apelin-13抑制VSMC分化。 4Akt/ERK信號(hào)通路介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)的VSMC增殖 在用Western blot分析檢測(cè)apelin-13對(duì)VSMC中Akt和ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，用0.1μM apelin-13刺激VSMC0min~6h后， Akt磷酸化在30min時(shí)達(dá)到峰值， ERK磷酸化水平在4h時(shí)達(dá)到最高,之后逐漸降低，但到6h仍高于對(duì)照組。 用50μMAkt抑制劑ly294002預(yù)孵育VSMC1h,再用0.1μM apelin-13刺激VSMC30min后，收集蛋白進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示，ly294002可以抑制apelin-13誘導(dǎo)的Akt和ERK磷酸化及cyclin D1表達(dá)。 用20μM ERK抑制劑PD98059預(yù)孵育VSMC1h,再用0.1μMapelin-13刺激VSMC4h后，收集蛋白進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示，PD98059可以抑制apelin-13誘導(dǎo)的ERK磷酸化和cyclin D1表達(dá)。這些結(jié)果表明，Akt/ERK信號(hào)通路介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)的VSMC增殖。 結(jié)論： 1Apelin-13促進(jìn)VSMC增殖和遷移。 2Apelin-13促進(jìn)VSMC增殖與誘導(dǎo)增殖相關(guān)基因cyclin D1, cyclin E1,NF-κB, and mmp-2表達(dá)相關(guān)。 3Apelin-13抑制VSMC分化。 4Akt/ERK信號(hào)通路介導(dǎo)Apelin-13誘導(dǎo)的VSMC增殖。
【關(guān)鍵詞】：VSMC Apelin-13 增殖 遷移 分化
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10
• 材料與方法10-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述 Apelin/APJ 的生物學(xué)功能研究進(jìn)展34-46
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 致謝46-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 張志;于波;;Apelin-13對(duì)急性缺血誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2008年09期

2 任鳳東;范小方;張鈺;楊架林;;新診斷的2型糖尿病患者血漿Apelin水平研究[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2010年23期

3 ;Apelin inhibits motor neuron apoptosis in the anterior horn following acute spinal cord and sciatic nerve injuries[J];Neural Regeneration Research;2011年20期

4 段曉輝;屈曉旋;常晉瑞;齊永芬;唐朝樞;;骨骼的內(nèi)分泌功能[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年04期

5 倪萍;張榮林;;Apelin在心血管疾病中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年03期

6 常紹鴻;張志敏;欒斌;;毛細(xì)支氣管炎合并心力衰竭患兒血漿Apelin和血管緊張素Ⅱ的表達(dá)[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2010年21期

7 封芬;周斌;譚安雄;;Apelin/APJ系統(tǒng)在心血管疾病中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2013年20期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 段圓慧;脂肪因子-visfatin及脂聯(lián)素在骨關(guān)節(jié)炎中的作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 彭小丁;社區(qū)女性骨質(zhì)疏松癥的現(xiàn)狀調(diào)查及影響骨密度的生化因子研究[D];中南大學(xué);2009年

3 張志;Apelin在急性心肌缺血損傷時(shí)的變化及其心肌保護(hù)作用機(jī)制[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

4 盧瑛;Apelin調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子和趨化因子的作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2009年

5 呂心瑞;Am80調(diào)節(jié)apelin基因表達(dá)的分子機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 李小艷;糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];中南大學(xué);2009年

2 曹立君;早期2型糖尿病患者血清Apelin水平與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2010年

3 朱佳花;Preptin通過(guò)ERK/CTGF信號(hào)途徑誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞增殖和分化[D];中南大學(xué);2010年

4 董圣梅;原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患者生活質(zhì)量評(píng)價(jià)及其影響因素研究[D];中南大學(xué);2010年

5 蔡世昌;急性缺血性腦損傷后Apelin神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2012年

  本文關(guān)鍵詞：Apelin促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的作用機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：398450