為探討CP2/P30基因?qū)ξ⑿‰[孢子蟲(chóng)的免疫保護(hù)作用,本研究在已知CP2,P30基因序列的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)引物,采用DNA重組技術(shù)將CP2,P30基因及兩基因串聯(lián)基因與真核表達(dá)載體pVAX-1相連,構(gòu)建重組真核表達(dá)載體,并將兩基因單獨(dú)及串聯(lián)克隆入原核表達(dá)載體PET28-a中,構(gòu)建原核表達(dá)載體。用重組真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,用間接免疫熒光方法驗(yàn)證其在真核細(xì)胞中的表達(dá);將原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達(dá)出重組CP2,P30及CP2/P30蛋白。將核酸疫苗與亞單位疫苗分別免疫小鼠和懷孕期的山羊檢測(cè)其免疫保護(hù)力。結(jié)果表明,擴(kuò)增CP2,P30開(kāi)放閱讀框,經(jīng)Blast比對(duì)顯示同源性分別為99.41%和99.91%,酶切鑒定后表明載體構(gòu)建成功。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的Hela細(xì)胞后,用間接免疫熒光方法在轉(zhuǎn)染后的Hela細(xì)中檢測(cè)到特異蛋白。提取總蛋白進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)到與目的蛋白大小相符的蛋白條帶,通過(guò)Western blot試驗(yàn)證實(shí)所得蛋白具有反應(yīng)原性;核酸疫苗免疫保護(hù)結(jié)果表明,試驗(yàn)組與對(duì)照組相比,特異性抗體滴度、CD4⁺與CD8⁺T淋巴細(xì)胞數(shù)均差異極顯著(...

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