目的初步探討MF59/h BCG復(fù)合佐劑增強重組結(jié)核分枝桿菌蛋白(TP)免疫反應(yīng)的機制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分別體外刺激RAW264.7細(xì)胞,刺激培養(yǎng)24 h后收集上清,ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG、TP及其配伍分別于小鼠左后腿皮下或肌肉注射,注射后24、48或72 h取注射部位的肌肉組織剪碎、PBS沖洗,采用膠原蛋白水解酶消化法和機械法結(jié)合將肌肉組織解離為單個細(xì)胞;熒光抗體標(biāo)記細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析巨噬細(xì)胞含量。結(jié)果任何免疫原刺激RAW264.7細(xì)胞,其培養(yǎng)上清均未檢測到IL-1β;MF59和h BCG均能刺激RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和MCP-1,且TNF-α分泌水平呈劑量依賴;而TP卻不能刺激RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和MCP-1。1∶100 MF59/h BCG(h BCG終質(zhì)量濃度為25、50μg/ml)刺激RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和MCP-1水平均顯著高于25、50μg/ml h BCG和空白對照(所有P<0.01);1∶250MF59/h BCG(h BCG終...

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圖3MF59與不同劑量hBCG組合皮下注射后24h、48h、72h注射部位肌肉組織中巨噬細(xì)胞百分比含量

MF59/TP刺激RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和MCP-1水平與MF59刺激相似；而1∶100MF59/hBCG刺激RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α水平顯著高于hBCG、1∶250MF59，其MCP-1水平顯著高于hBCG；因此，MF59與TP聯(lián)合體外刺激RAW264.7....

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