目的：作為現(xiàn)今最為流行的嗜神經(jīng)性病毒之一，腸病毒71型（enterovirus type71, EV71）近年來在亞太地區(qū)頗為盛行，引起各國(guó)政府高度重視。本課題旨在制備獲得抗EV71單克隆抗體，鑒定并分析其應(yīng)用及生物學(xué)功能，以探討其于臨床診斷治療及抗病毒天然物篩選等方面的應(yīng)用。 方法：以EV71Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠，采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合，以EV71感染之RD（Human Rhabdomyosarcoma，人橫紋肌肉瘤）細(xì)胞作為抗體篩選細(xì)胞，經(jīng)IFA（Immunofluorescence assay，免疫熒光）反復(fù)篩選及克隆化培養(yǎng)，最終得到能夠穩(wěn)定分泌抗EV71單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，并對(duì)其抗體亞型及特異性進(jìn)行鑒定。對(duì)各株抗體在FCM（flow cytometry，流式細(xì)胞）、Western blot、capture-ELISA（抗原捕獲ELISA）、病毒中和等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行分析，并通過peptide-ELISA（肽段-ELISA）鑒定得各自相應(yīng)抗原識(shí)別表位。應(yīng)用所得抗體進(jìn)行病毒檢測(cè)及天然萃取物抗病毒功效鑒定。 結(jié)果：（1）共篩選...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1抗EV71單克隆抗體細(xì)胞免疫熒光鑒定infected組為EV71感染24h后RD細(xì)胞，mock組為正常未感染RD細(xì)胞

結(jié)果第一部分抗EV71單克隆抗體的制備與鑒定一、雜交瘤細(xì)胞株建立利用EV71Tainan/4643/98病毒株免疫6-8周齡BALB/c小鼠，以常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞融合，將復(fù)測(cè)為陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)克隆化培養(yǎng)后，共獲得5株能穩(wěn)定分泌特異性抗EV71抗體的雜....

圖2抗EV71單克隆抗體亞型鑒定Templateexample為MouseIgCaptureBeadArray示意圖，mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27為各單克隆抗體分析鑒定結(jié)果

17圖2抗EV71單克隆抗體亞型鑒定Templateexample為MouseIgCaptureBeadArray示意圖，mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27為各單克隆抗體分析鑒定結(jié)果。

圖3抗EV71單克隆抗體特異性鑒定mock組為正常RD細(xì)胞，其余為不同病毒各自感染RD細(xì)胞，PC組為positivecontrol，用各病毒對(duì)應(yīng)之特異性抗體作為陽(yáng)性對(duì)照

18圖3抗EV71單克隆抗體特異性鑒定mock組為正常RD細(xì)胞，其余為不同病毒各自感染RD細(xì)胞，PC組為positivecontrol，用各病毒對(duì)應(yīng)之特異性抗體作為陽(yáng)性對(duì)照。各單克隆抗體組，則以各含抗體細(xì)胞培養(yǎng)上清液為特異性一抗。（藍(lán)色—Hoechst，綠....

圖4抗EV71單克隆抗體流式細(xì)胞檢測(cè)PC組為positivecontrol，一抗為已知EV71抗體03F05-1，為陽(yáng)性對(duì)照

20圖4抗EV71單克隆抗體流式細(xì)胞檢測(cè)PC組為positivecontrol，一抗為已知EV71抗體03F05-1，為陽(yáng)性對(duì)照。各單克隆抗體組含抗體細(xì)胞培養(yǎng)上清液為特異性一抗�！瓰閙ock組，即未被病毒感染正常RD細(xì)胞，—infected組，即....

本文編號(hào)：3967197