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發(fā)展檢測腸病毒71型(EV71)感染之單克隆抗體研究

發(fā)布時間:2024-05-08 00:06
  目的:作為現(xiàn)今最為流行的嗜神經(jīng)性病毒之一,腸病毒71型(enterovirus type71, EV71)近年來在亞太地區(qū)頗為盛行,引起各國政府高度重視。本課題旨在制備獲得抗EV71單克隆抗體,鑒定并分析其應(yīng)用及生物學(xué)功能,以探討其于臨床診斷治療及抗病毒天然物篩選等方面的應(yīng)用。 方法:以EV71Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合,以EV71感染之RD(Human Rhabdomyosarcoma,人橫紋肌肉瘤)細(xì)胞作為抗體篩選細(xì)胞,經(jīng)IFA(Immunofluorescence assay,免疫熒光)反復(fù)篩選及克隆化培養(yǎng),最終得到能夠穩(wěn)定分泌抗EV71單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞株,并對其抗體亞型及特異性進(jìn)行鑒定。對各株抗體在FCM(flow cytometry,流式細(xì)胞)、Western blot、capture-ELISA(抗原捕獲ELISA)、病毒中和等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行分析,并通過peptide-ELISA(肽段-ELISA)鑒定得各自相應(yīng)抗原識別表位。應(yīng)用所得抗體進(jìn)行病毒檢測及天然萃取物抗病毒功效鑒定。 結(jié)果:(1)共篩選...

【文章頁數(shù)】:61 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖1抗EV71單克隆抗體細(xì)胞免疫熒光鑒定infected組為EV71感染24h后RD細(xì)胞,mock組為正常未感染RD細(xì)胞

圖1抗EV71單克隆抗體細(xì)胞免疫熒光鑒定infected組為EV71感染24h后RD細(xì)胞,mock組為正常未感染RD細(xì)胞

結(jié)果第一部分抗EV71單克隆抗體的制備與鑒定一、雜交瘤細(xì)胞株建立利用EV71Tainan/4643/98病毒株免疫6-8周齡BALB/c小鼠,以常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞融合,將復(fù)測為陽性的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)克隆化培養(yǎng)后,共獲得5株能穩(wěn)定分泌特異性抗EV71抗體的雜....


圖2抗EV71單克隆抗體亞型鑒定Templateexample為MouseIgCaptureBeadArray示意圖,mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27為各單克隆抗體分析鑒定結(jié)果

圖2抗EV71單克隆抗體亞型鑒定Templateexample為MouseIgCaptureBeadArray示意圖,mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27為各單克隆抗體分析鑒定結(jié)果

17圖2抗EV71單克隆抗體亞型鑒定Templateexample為MouseIgCaptureBeadArray示意圖,mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27為各單克隆抗體分析鑒定結(jié)果。


圖3抗EV71單克隆抗體特異性鑒定mock組為正常RD細(xì)胞,其余為不同病毒各自感染RD細(xì)胞,PC組為positivecontrol,用各病毒對應(yīng)之特異性抗體作為陽性對照

圖3抗EV71單克隆抗體特異性鑒定mock組為正常RD細(xì)胞,其余為不同病毒各自感染RD細(xì)胞,PC組為positivecontrol,用各病毒對應(yīng)之特異性抗體作為陽性對照

18圖3抗EV71單克隆抗體特異性鑒定mock組為正常RD細(xì)胞,其余為不同病毒各自感染RD細(xì)胞,PC組為positivecontrol,用各病毒對應(yīng)之特異性抗體作為陽性對照。各單克隆抗體組,則以各含抗體細(xì)胞培養(yǎng)上清液為特異性一抗。(藍(lán)色—Hoechst,綠....


圖4抗EV71單克隆抗體流式細(xì)胞檢測PC組為positivecontrol,一抗為已知EV71抗體03F05-1,為陽性對照

圖4抗EV71單克隆抗體流式細(xì)胞檢測PC組為positivecontrol,一抗為已知EV71抗體03F05-1,為陽性對照

20圖4抗EV71單克隆抗體流式細(xì)胞檢測PC組為positivecontrol,一抗為已知EV71抗體03F05-1,為陽性對照。各單克隆抗體組含抗體細(xì)胞培養(yǎng)上清液為特異性一抗!瓰閙ock組,即未被病毒感染正常RD細(xì)胞,—infected組,即....



本文編號:3967197

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