阿爾茨海默氏癥 (Alzheimer’s disease, AD) 是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性變性疾病,臨床主要表現(xiàn)為認(rèn)識能力降低、行為異常及日常生活能力逐漸下降而需要照顧。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,Alzheimer’s disease是威脅老年人群健康的主要病種之一,85歲以上人群發(fā)病率可高達(dá)50%。美國1994年僅花費(fèi)在Alzheimer’s disease病人護(hù)理上的費(fèi)用就高達(dá)1100億美元。迄今為止,Alzheimer’s disease的病因及發(fā)病機(jī)制還是個(gè)不解之謎。然而,大量研究結(jié)果表明,AD的發(fā)生是多病因相互作用的結(jié)果,可能存在多種致病機(jī)制。全面、深入地了解各種致病機(jī)制對于最終征服AD具有重大的意義。 研究發(fā)現(xiàn),AD患者大腦中缺乏一種神經(jīng)元的抑制因子,即神經(jīng)生長抑制因子 (Growth Inhibitory Factor, GIF)。該因子的缺少致使AD病人腦中神經(jīng)營養(yǎng)活性增高,從而導(dǎo)致神經(jīng)元過度生長。這種畸態(tài)的生長使得大腦營養(yǎng)水平供不應(yīng)求,并最終導(dǎo)致了神經(jīng)元的纖維化。這也是AD可能的致病機(jī)制之一。 從結(jié)構(gòu)上看,GIF應(yīng)該屬于金屬硫蛋白家族,因此它也被命名為MT3。從一級結(jié)構(gòu)上...

【文章頁數(shù)】：171 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 序論
    第一節(jié) Alzheimer’s Disease簡介
    第二節(jié) 從神經(jīng)生長抑制因子(GIF)到MT3
    第三節(jié) MT3的研究概況
        1.3.1 MT3的分布
        1.3.2 MT3的表達(dá)調(diào)控
        1.3.3 MT3的功能
        1.3.4 MT3的結(jié)構(gòu)
        1.3.5 MT3的性質(zhì)
    第四節(jié) MT3在MT家族中的特異性
    參考文獻(xiàn)
第二章 MT3的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)研究
    第一節(jié) 人腦MT3的基因構(gòu)建、表達(dá)、純化及鑒定
        2.1.1 人腦MT3的基因構(gòu)建
        2.1.2 MT3蛋白的表達(dá)和純化方案
        2.1.3 MT3的純度鑒定
        2.1.4 MT3的重組
    第二節(jié) MT3的結(jié)構(gòu)探索
        2.2.1 MT3中的金屬含量
        2.2.2 MT3的柱層析研究
        2.2.3 MT3的光譜性質(zhì)研究
        2.2.4 MT3的立體結(jié)構(gòu)
            2.2.4.1 1H NMR研究
            2.2.4.2 15N NMR研究
            2.2.4.3 113Cd NMR研究
    第三節(jié) MT3的性質(zhì)研究
        2.3.1 MT3的穩(wěn)定性
            2.3.1.1 MT3的熱穩(wěn)定性
            2.3.1.2 MT3的化學(xué)穩(wěn)定性
            2.3.1.3 MT3對抗生物酶水解的穩(wěn)定性
        2.3.2 MT3的反應(yīng)性質(zhì)
            2.3.2.1 MT3與DTNB的作用
            2.3.2.2 MT3與EDTA的作用
    第四節(jié) Zn7-MT3的性質(zhì)
    第五節(jié) MT3的生理活性
    參考文獻(xiàn)
第三章 走進(jìn)MT3分子內(nèi)部:突變體蛋白的研究
    第一節(jié) EAAEAE插入六肽對MT3的影響
        3.1.1 突變分析及突變體蛋白的制備
        3.1.2 EAAEAE六肽插入段對MT3性質(zhì)的影響
    第二節(jié) T(5)的作用
        3.2.1 突變分析及突變體蛋白的制備
        3.2.2 T(5)對MT3性質(zhì)的影響
        3.2.3 T(5)對維系MT3生理功能的重要性
    第三節(jié) 兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間的相互關(guān)系
        3.3.1 突變分析及突變體蛋白的制備
        3.3.2 單結(jié)構(gòu)域的性質(zhì)及應(yīng)用
            3.3.2.1 基本譜學(xué)性質(zhì)
            3.3.2.2 質(zhì)子化去折疊研究
            3.3.2.3 各結(jié)構(gòu)域突變體蛋白的反應(yīng)性質(zhì)研究
        3.3.3 ((結(jié)構(gòu)域的功能探討
        3.3.4 ((結(jié)構(gòu)域向((結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)化研究
    第四節(jié) linker在MT3分子中的作用
        3.4.1 突變分析及突變體蛋白的制備
        3.4.2 Linker對MT3結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的重要性
        3.4.3 為什么Linker是KKS?
    第五節(jié) 色氨酸的啟示
        3.5.1 基因構(gòu)建和突變體蛋白的制備
        3.5.2 E4W突變對hMT3性質(zhì)的影響
        3.5.3 Raman光譜中的應(yīng)用
        3.5.4 熒光光譜研究MT3
    參考文獻(xiàn)
第四章 尋找MT3作用的靶分子
    第一節(jié) 靶蛋白的尋找方案
    第二節(jié) 酵母雙雜交技術(shù)探尋MT3的作用分子
        4.2.1 酵母雙雜交技術(shù)的基本原理
        4.2.2 酵母雙雜交技術(shù)探尋MT3的作用分子
    第三節(jié) 噬菌體展示技術(shù)探尋MT3的作用分子
        4.3.1 噬菌體展示技術(shù)的基本原理
        4.3.2 噬菌體展示技術(shù)探尋MT3的作用分子
            4.3.2.1 材料及試劑
            4.3.2.2 實(shí)驗(yàn)部分
            4.3.2.3 結(jié)果與討論
    參考文獻(xiàn)
Appendix1
Appendix2
致謝



本文編號：3939552