[目的]對金黃色葡萄球菌前噬菌體的PT1028ORF001基因進行生物信息學(xué)分析,并進行原核表達,為金黃色葡萄球菌前噬菌體基因的功能研究提供參考數(shù)據(jù)。[方法]將金黃色葡萄球菌ATCC 25923菌株功能未知的基因通過BLAST比對,從中發(fā)現(xiàn)了一個噬菌體PT1028的基因序列,將該基因命名為PT1028ORF001。使用Protparam、Prot Comp9. 0、NCBI保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等在線生物信息軟件,分析PT1028ORF001蛋白的理化性質(zhì)、亞細胞定位、保守結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)域、磷酸化修飾位點、二級結(jié)構(gòu)和三維結(jié)構(gòu)。用自行設(shè)計的引物擴增PT1028ORF001基因,擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切回收后與原核表達載體p ET-32a相連接,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒,將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E. coli TG1內(nèi),經(jīng)菌落PCR鑒定后,增菌培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)化E. coli BL21 (DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達后進行SDS-PAGE檢測分析。[結(jié)果]PT1028ORF001蛋白由569個氨基酸組成,相對分子質(zhì)量為64...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 方法
        1.2.1 分析PT1028ORF001蛋白的特征及亞細胞定位
        1.2.2 分析保守結(jié)構(gòu)域
        1.2.3 預(yù)測跨膜區(qū)
        1.2.4 分析磷酸化修飾位點
        1.2.5 預(yù)測PT1028ORF001蛋白的二級結(jié)構(gòu)
        1.2.6 預(yù)測PT1028ORF001蛋白的三維結(jié)構(gòu)
        1.2.7 PT1028ORF001基因的擴增與重組表達載體的構(gòu)建
        1.2.8 PT1028ORF001基因的誘導(dǎo)表達
2 結(jié)果與分析
    2.1 PT1028ORF001蛋白的特征及亞細胞定位
    2.2 保守結(jié)構(gòu)域分析
    2.3 跨膜區(qū)預(yù)測
    2.4 磷酸化修飾位點分析
    2.5 PT1028ORF001蛋白的二級結(jié)構(gòu)
    2.6 PT1028ORF001蛋白的三維結(jié)構(gòu)
    2.7 PT1028ORF001基因擴增與重組表達載體的構(gòu)建
    2.8 重組蛋白獲得了表達
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