本文關(guān)鍵詞：HBV對人近端腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化作用及其機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 通過將PHY106-HBV質(zhì)粒（含C基因型HBV的全基因組）轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的正常人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2），，研究乙型肝炎病毒（HBV）在HK-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和對HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用及其機(jī)制。初步探討乙型肝炎病毒在乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎（HBV-GN）中的作用機(jī)制。 方法： 將體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，分為HK-2組、HK-2-PHY106組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PHY106組）、HK-2-PHY106-HBV組（轉(zhuǎn)染PHY106-HBV質(zhì)粒組）和SB203580（轉(zhuǎn)染PHY106-HBV質(zhì)粒前加入P38絲裂原活化蛋白激酶特異性抑制劑預(yù)處理）組。用脂質(zhì)體lipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞。用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA法）檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg與HBeAg的含量。免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測轉(zhuǎn)染72h后各組E-鈣粘素（E-cadherin）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)。半定量RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染72h后轉(zhuǎn)化生長因子-1（TGF-β1）mRNA在各組細(xì)胞的表達(dá)情況。Westernblot印跡檢測轉(zhuǎn)染72h后各組E-cadherin、α-SMA、磷酸化P38絲裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）和P38MAPK（P38絲裂原活化蛋白激酶）的蛋白表達(dá)情況及加入P38MAPK特異性抑制劑SB203580后對E-cadherin和α-SMA蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果: HK-2-PHY106-HBV組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中可檢測到HBsAg和HBeAg的高表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)染色及Western印跡均顯示HK-2-PHY106-HBV組E-cadherin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.05），而α-SMA蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05）。RT-PCR法顯示HK-2-PHY106-HBV組的TGF-β1mRNA表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）。Western印跡顯示HK-2-PHY106-HBV組的p-P38MAPK蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05），加入SB203580后p-P38MAPK蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），且能阻止HBV引起的E-cadherin蛋白下調(diào)和α-SMA蛋白上調(diào)（P＜0.05）。 結(jié)論： HBV可在HK-2細(xì)胞內(nèi)高效復(fù)制，表達(dá)乙肝表面抗原和乙肝e抗原，并且能夠?qū)е翲K-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，其機(jī)制可能是通過激活TGF-β1/P38MAPK信號通路來實(shí)現(xiàn)的，P38MAPK的特異性抑制劑SB203580可有效阻止HBV引起的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 人近端腎小管上皮細(xì)胞 轉(zhuǎn)染 細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化 TGF-β1/P38MAPK
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 主要符號表12-13
• 前言13-14
• 材料和方法14-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 1.1 細(xì)胞株14
• 1.2 質(zhì)粒14
• 1.3 主要試劑14-15
• 1.4 主要儀器15-16
• 1.5 主要試劑配制16-17
• 1.6 其他17
• 2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟17-25
• 2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與復(fù)蘇17-18
• 2.2 PHY106-HBV質(zhì)粒的提取與鑒定18-20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組20
• 2.4 PHY106-HBV轉(zhuǎn)染至人腎小管上皮細(xì)胞20
• 2.5 培養(yǎng)上清液中HBsAg與HBeAg的檢測20
• 2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測 HK-2 中α-SMA 、E-cadherin 蛋白的表達(dá)20-21
• 2.7 HK-2 細(xì)胞總 RNA 的提取21-22
• 2.8 RT-PCR 檢測 HBV 對 HK-2 細(xì)胞 TGF-β1mRNA 表達(dá)的影響22-23
• 2.9 HK-2 細(xì)胞蛋白的提取23-24
• 2.10 Western blot檢測α-SMA、E-cadherin、p-P38MAPK和P38MAPK的表達(dá)24-25
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 結(jié)果26-28
• 1 PHY106-HBV 質(zhì)粒的鑒定結(jié)果26
• 2 HBV 對 HK-2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響26
• 3 上清液中 HBsAg 與 HBeAg 的檢測結(jié)果26
• 4 乙型肝炎病毒對 HK-2 細(xì)胞 E-cadherin 和α-SMA 蛋白表達(dá)的影響26-27
• 5 乙型肝炎病毒對 HK-2 細(xì)胞 TGF-β1mRNA 表達(dá)的影響27
• 6 乙型肝炎病毒對HK-2細(xì)胞p-P38MAPK和P38MAPK蛋白表達(dá)的影響27-28
• 討論28-32
• 結(jié)論32-33
• 附圖33-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 在校期間取得成果48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張勇;張t

本文編號：391598