目的提取小鼠顱骨原代成骨細胞,并建立成骨細胞衰老模型。方法取5只新出生5～7 d的昆明乳鼠顱骨,采取酶消化法與組織塊培育法獲取原代成骨細胞,經(jīng)鑒定后,采用D-半乳糖誘導(dǎo)成骨細胞衰老,行β-半乳糖苷酶衰老染色、RT-PCR法分析ALP,BMP-2的表達。結(jié)果光學(xué)顯微鏡下觀察細胞呈三角形,長梭形,不規(guī)則多邊形,堿性磷酸酶染色呈陽性且陽性率為90%。經(jīng)D-半乳糖處理后,成骨細胞β-半乳糖苷酶衰老染色陽性細胞數(shù)較對照組陽性細胞數(shù)顯著增多(P<0.01),RT-PCR結(jié)果表明衰老成骨細胞中mRNAALP,BMP-2的表達較對照組均顯著降低(P<0.05)。結(jié)論該研究采取D-半乳糖誘導(dǎo)法成功建立了小鼠原代成骨細胞衰老模型。

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【部分圖文】：

圖1不同天數(shù)細胞爬出骨片狀況

按照2^－△△Ct計算基因相對表達量。表1引物序列2.8統(tǒng)計方法應(yīng)用SPSS25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)比較分析。組間比較（x±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3實驗結(jié)果3.1倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)骨塊貼壁2d后有細胞自骨碎片爬出，貼壁逐漸展開（如圖1A....

圖3成骨細胞β-半乳糖苷酶染色情況分析

·論著·系統(tǒng)醫(yī)學(xué)SYSTEMSMEDICINE系統(tǒng)醫(yī)學(xué)2019年8月第4卷第16期照組相比，D-半乳糖處理組陽性細胞數(shù)顯著增多（P<0.01），如圖3。圖3成骨細胞β-半乳糖苷酶染色情況分析注：A.成骨細胞β-半乳糖苷酶染色情況，a為對照組，b為D半乳糖處理組(10×)；B.成骨....

圖4成骨細胞基因BMP2及ALP表達變化

圖2原代細胞堿性磷酸酶染色觀察（A:×4B:×100）

民,章嵐.自噬對成骨細胞調(diào)控作用的研究進展[J].中國骨質(zhì)疏松雜志,2018,24(11):1535-1540.[3]汪琳.老年血液通過CCL11加速年輕小鼠骨量丟失的研究[D].上海：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);海軍軍醫(yī)大學(xué),2018.[4]胡孝麗,王佳宇,余和東,等.大鼠胎鼠....

本文編號：3914652