本文關(guān)鍵詞：線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較及梓醇的干預(yù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦血管疾病(又叫腦中風(fēng),腦卒中)是一種嚴(yán)重影響人類(lèi)健康的常見(jiàn)病,缺血性腦血管疾病(ICVD, Ischemic Cerebrovascular Disease)約占85%。腦缺血損傷造成不同程度神經(jīng)功能障礙,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)和心理負(fù)擔(dān)。 因此,尋找與開(kāi)發(fā)防治缺血性腦血管病的藥物,成為當(dāng)前醫(yī)藥學(xué)界工作者特別關(guān)注的研究課題。動(dòng)物腦缺血模型為腦缺血藥物篩選提供了有力的手段。模擬人類(lèi)腦缺血特點(diǎn),制備局灶腦缺血模型,研究腦缺血病理病生變化規(guī)律,對(duì)于尋找腦缺血治療靶點(diǎn),藥物篩選評(píng)價(jià)都具有重要意義。 目的：通過(guò)線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較和梓醇對(duì)兩種腦缺血模型干預(yù)效應(yīng)研究,以期找出兩種方法制備的局灶性腦缺血模型的特點(diǎn),為正確選擇動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯磕X缺血病理病生機(jī)制和新藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分：線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較 方法：采用線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶永久性腦缺血模型(Permanent Middle Cerebral Artery Occlusion, pMCAO),采用神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(神經(jīng)肌肉功能評(píng)分、肌力測(cè)試、Bederson神經(jīng)功能評(píng)分、平衡木行走試驗(yàn))和腦梗死面積測(cè)定(TTC染色)以及死亡率觀測(cè)比較兩種方法制備腦缺血模型的特點(diǎn)。 結(jié)果：線(xiàn)栓法制備局灶永久性腦缺血模型,缺血區(qū)梗死面積隨時(shí)間增加而增大,24h、48h缺血面積分別占全腦面積的25.6%和44.9%,72h大腦缺血區(qū)域已達(dá)全腦的45.7%。實(shí)驗(yàn)中,模型小鼠死亡率高達(dá)28.57%,神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試選用神經(jīng)肌肉功能評(píng)分和肌力測(cè)試兩種方法,小鼠各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)行為學(xué)功能缺陷隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)有加重趨勢(shì),但各組之間行為學(xué)測(cè)試結(jié)果無(wú)顯著性差異。 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型,凝閉大鼠大腦中動(dòng)脈不同部位梗塞面積有明顯不同,表現(xiàn)為皮層梗死、皮層下梗死,梗死范圍因凝閉部位不同而有差異。模型大鼠成功率可達(dá)100%,死亡率極低。實(shí)驗(yàn)選取凝閉大腦中動(dòng)脈第2分支點(diǎn)的近心端,大鼠大腦缺血梗死面積隨時(shí)間推移有所增加,6h、12h、24h、48h和72h大鼠大腦缺血區(qū)域分別占全腦的2.61%、7.76%、19.26%、20.16%和25.05%,死亡率為零。神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分選用Bederson神經(jīng)功能評(píng)分,肌力測(cè)試和平衡木行走試驗(yàn)三種方法進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果顯示,隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng),Bederson神經(jīng)功能評(píng)分和肌力測(cè)試評(píng)分有增加趨勢(shì),平衡木行走評(píng)分有降低趨勢(shì),統(tǒng)計(jì)結(jié)果各組間無(wú)顯著性差異。 第二部分：梓醇對(duì)線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型的干預(yù)研究 方法：采用線(xiàn)栓法與電凝法制備動(dòng)物局灶永久性腦缺血模型,采用神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試(神經(jīng)肌肉功能評(píng)分、肌力測(cè)試、Bederson神經(jīng)功能評(píng)分、平衡木行走試驗(yàn))和腦梗死面積測(cè)定(TTC染色)研究梓醇對(duì)兩種方法制備的局灶永久性腦缺血模型的干預(yù)效應(yīng)：(1)治療時(shí)間窗研究；(2)量效關(guān)系研究。Western Blot檢測(cè)大鼠局灶永久性腦缺血后JAK2/STAT3/VEGF信號(hào)蛋白隨時(shí)間變化規(guī)律以及梓醇的影響。 結(jié)果：短期治療研究顯示,神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試各組間無(wú)顯著性差異,梓醇中劑量(7mg/kg)和高劑量(14.2mg/kg)顯著減小動(dòng)物缺血區(qū)梗死面積,提示梓醇具有減小腦缺血?jiǎng)游锶毖獏^(qū)梗死面積作用,呈現(xiàn)出一定量效關(guān)系。神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試與TTC染色結(jié)果不一致。治療時(shí)間窗結(jié)果顯示,選擇術(shù)前0.5h、術(shù)后1h和24h首次給藥,神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試各組間無(wú)顯著性差異,梗死面積研究表明術(shù)前0.5h、術(shù)后1h首次給藥梓醇治療顯著減小梗死面積,雖然缺血24h后首次給藥仍然有效,但術(shù)前0.5h,術(shù)后1h首次給藥效果最佳,缺血面積分別減小了33.65%和33.9%。神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試沒(méi)有顯示出明顯差異。 長(zhǎng)期治療效應(yīng)結(jié)果顯示,梓醇高劑量(10mg/kg)在缺血后7d和15d能顯著減輕神經(jīng)行為缺陷,改善缺血大鼠神經(jīng)行為功能,減小缺血區(qū)梗死面積。神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試(Bederson神經(jīng)功能評(píng)分、肌力測(cè)試、平衡木行走試驗(yàn))在缺血后28d也能夠反映出梓醇給藥組與模型組神經(jīng)行為功能恢復(fù)之間的差異,提示梓醇對(duì)腦缺血神經(jīng)缺損有一定修復(fù)作用,Bederson神經(jīng)功能評(píng)分、肌力測(cè)試、平衡木行走試驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)整合功能,能夠較好的評(píng)價(jià)缺血大鼠一周后的神經(jīng)行為功能恢復(fù)情況,有效地反映藥物的治療效應(yīng)。 本研究觀察了大鼠局灶永久性腦缺血后JAK2/STAT3/VEGF信號(hào)通路蛋白表達(dá)隨時(shí)間變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)腦缺血后1d到7d期間,缺血區(qū)VEGF蛋白表達(dá)持續(xù)增高,提示缺血后早期(1-7d)腦水腫可能與VEGF表達(dá)上調(diào)有關(guān),而后期VEGF的下調(diào)作用顯示其血管新生效應(yīng)的保護(hù)效應(yīng)不足,15d之后開(kāi)始下降,并一直延續(xù)至28d。梓醇治療后,在缺血15d上調(diào)VEGF蛋白表達(dá),至21d蛋白表達(dá)維持一定水平。結(jié)合課題組前期研究結(jié)果,提示梓醇在早期下調(diào)VEGF蛋白,后期上調(diào)VEGF蛋白,這種調(diào)節(jié)與JAK2/STAT3信號(hào)通路有關(guān)。 結(jié)論： (1)線(xiàn)栓法制備腦缺血模型受影響因素多,梗死面積大,死亡率高,適合于腦缺血急性期腦保護(hù)研究。 (2)電凝法局灶永久性腦缺血模型具有可視缺血面積可控,死亡率極低,可用于腦缺血后神經(jīng)修復(fù)研究,皮質(zhì)、皮質(zhì)下、皮層梗死病理病生機(jī)制及藥物篩選研究。 (3)TTC染色反映腦梗死面積,能夠較好反映出缺血后急性期各時(shí)間變化差異,但所選方法(神經(jīng)肌肉功能評(píng)分、肌力測(cè)試、Bederson神經(jīng)功能評(píng)分、平衡木行走試驗(yàn))不能較好顯示出急性期所觀察時(shí)點(diǎn)之間神經(jīng)行為學(xué)差異。 (4)梓醇中劑量(7mg/kg)和高劑量(14.2mg/kg)治療腦缺血有效,治療時(shí)間窗研究表明術(shù)前0.5h、術(shù)后1h首次給藥治療顯著減小梗死面積。 (5)梓醇治療腦缺血可能與調(diào)節(jié)JAK2/STAT3/VEGF蛋白信號(hào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：局灶永久性腦缺血(線(xiàn)栓法 電凝法) 梓醇 神經(jīng)功能恢復(fù) 梗死面積(TTC) JAK2/STAT3/VEGF
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R743.3
【目錄】：

• 英語(yǔ)縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-15
• 第一部分：不同方法制備局灶永久性腦缺血模型比較研究15-25
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組15
• 1.2 儀器與試劑15
• 1.3 線(xiàn)栓法制備局灶永久性腦缺血模型15-16
• 1.4 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型16
• 1.5 模型納入及排除標(biāo)準(zhǔn)16
• 1.6 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)方法16-18
• 1.7 TTC染色18-19
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法19
• 2 結(jié)果19-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)一：線(xiàn)栓法制備局灶永久性腦缺血模型研究19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)二：電凝法制備局灶永久性腦缺血模型研究20-23
• 3 討論23-24
• 4 小結(jié)24-25
• 第二部分 梓醇對(duì)線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型的干預(yù)作用研究25-37
• 1 材料與方法25-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組25-26
• 1.2 儀器與試劑26
• 1.3 藥物配制與干預(yù)26-27
• 1.4 線(xiàn)栓法制備局灶永久性腦缺血模型27
• 1.5 電凝法制備局灶永久性腦缺血模型27
• 1.6 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)方法27-28
• 1.7 TTC染色28
• 1.8 Western Blot檢測(cè)及分析28
• 1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法28-29
• 2 結(jié)果29-34
• 2.1 梓醇樣品純度鑒定29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)一 梓醇治療腦缺血短期效應(yīng)研究29-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)二 梓醇治療腦缺血長(zhǎng)期效應(yīng)研究31-33
• 2.4 實(shí)驗(yàn)三 腦缺血后JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白隨時(shí)間變化規(guī)律及梓醇的影響33-34
• 3 討論34-36
• 4 小結(jié)36-37
• 全文總結(jié)37-39
• 創(chuàng)新點(diǎn)及其意義39-41
• 思考與展望41-43
• 文獻(xiàn)綜述43-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研工作匯報(bào)53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 王橋生;符暉;曾紅科;;線(xiàn)栓法大鼠局灶腦缺血模型的改進(jìn)與評(píng)價(jià)[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2012年03期

2 趙帥;樊小農(nóng);孟智宏;張俊清;韓科;牟蛟;張超;焦洋;;線(xiàn)栓法制備大鼠中動(dòng)脈缺血閉塞模型研究進(jìn)展[J];江西中醫(yī)藥;2012年03期

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  本文關(guān)鍵詞：線(xiàn)栓法與電凝法制備局灶性腦缺血模型比較及梓醇的干預(yù)作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：389242