本文關(guān)鍵詞：h IGF-1基因轉(zhuǎn)染人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：體外研究hIGF-1基因轉(zhuǎn)染人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)學(xué)方法,檢測(cè)并觀察基因轉(zhuǎn)染后臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCB-MSCs)的生物學(xué)變化。 方法：利用密度梯度離心法與細(xì)胞貼壁法相結(jié)合分離培養(yǎng)hUCB-MSCs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原標(biāo)記。構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒并以X-tremen HP介導(dǎo)將含hIGF-1基因的質(zhì)粒pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ轉(zhuǎn)染hUC-MSCs,倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間段細(xì)胞上清液中hIGF-1的濃度,免疫熒光與RT-PCR檢測(cè)hIGF-1在細(xì)胞中的表達(dá),免疫組化染色檢測(cè)Ⅱ型膠原表達(dá)。 結(jié)果：密度梯度離心法與細(xì)胞貼壁法相結(jié)合可獲得純度較高的hUCB-MSCs,流式細(xì)胞儀細(xì)胞表面抗原標(biāo)志CD90、CD105、CD146表達(dá)陽(yáng)性,CD34、CD45、Anti-HLA-DR表達(dá)陰性。經(jīng)X-tremen HP介導(dǎo)hIGF-1目的基因可導(dǎo)入U(xiǎn)CB-MSCs其轉(zhuǎn)染效率為(28.63±7.59)%,免疫熒光和RT-PCR鑒定均檢測(cè)到hIGF-1的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)由長(zhǎng)梭形逐漸變?yōu)閳A形或橢圓形,以后逐漸變?yōu)槎嘟切�。ELISA檢測(cè)hIGF-Ⅰ蛋白質(zhì)分泌在48h達(dá)到高峰(34.68±1.4ng/ml),與對(duì)照組相比,具有顯著性差異(p0.01)。細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示經(jīng)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)陽(yáng)性。 結(jié)論：成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ,密度梯度離心法與細(xì)胞貼壁法相結(jié)合可成功分離出人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,以脂質(zhì)體介導(dǎo)hIGF-Ⅰ基因可成功轉(zhuǎn)染hUCB-MSCs,目的基因和標(biāo)記基因均可獲得表達(dá),轉(zhuǎn)染后細(xì)胞可表達(dá)II型膠原。
【關(guān)鍵詞】：臍血 干細(xì)胞 人胰島素樣生長(zhǎng)因子1 基因轉(zhuǎn)染 脂質(zhì)體
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-4
• 目錄4-5
• 引言5-6
• 第一章 材料與方法6-11
• 1.1 材料6
• 1.1.1 主要試劑6
• 1.1.2 主要儀器6
• 1.26-11
• 1.2.1 構(gòu)建pIRES2-EGFP-hIGF-I6-7
• 1.2.2 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)7-8
• 1.2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物8
• 1.2.4 h UCB-MSCs生長(zhǎng)曲線的測(cè)定8
• 1.2.5 pIRES2-EGFP-hIGF-I轉(zhuǎn)染hUCB-MSCs8-9
• 1.2.6 ELISA檢測(cè)h IGF-1的分泌表達(dá)9
• 1.2.7 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)h IGF-1在h UCB-MSCS中表達(dá)9
• 1.2.8 RT-PCR檢測(cè)h IGF-1在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)9-10
• 1.2.9 檢測(cè)h UCB-MSCs中Ⅱ型膠原的表達(dá)10-11
• 第二章 結(jié)果11-20
• 2.1 真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP-hIGF-I的鑒定11-13
• 2.2 h UCB-MSCs的分離培養(yǎng)與傳代13-15
• 2.3 細(xì)胞流式儀檢測(cè)結(jié)果15-16
• 2.4 描記h UCB-MSCs生長(zhǎng)曲線16
• 2.5 pIRES2-EGFP-hIGF-I轉(zhuǎn)染hUCB-MSCs16-17
• 2.6 h lGF-1在h UCB-MSCs表達(dá)的檢測(cè)17-19
• 2.7 免疫組化檢測(cè)轉(zhuǎn)染后h UCB-MSCs中Ⅱ型膠原的表達(dá)19-20
• 第三章 討論20-22
• 結(jié)論22-23
• 參考文獻(xiàn)23-25
• 綜述25-34
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果34-35
• 致謝35-37

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

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本文編號(hào)：386514