本文關(guān)鍵詞：甘丙肽過表達轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及其生物學特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 構(gòu)建甘丙肽（galanin,GAL）過表達轉(zhuǎn)基因小鼠模型； 初探甘丙肽過表達轉(zhuǎn)基因小鼠的生物學性狀。 方法: 重組質(zhì)粒PUC18-PDGF β-GAL用XbaⅠ、HindⅢ進行雙酶切，將連接有啟動子PDGFβ的甘丙肽基因片段回收純化后，用顯微注射的方法將甘丙肽基因片段注入受精卵的雄原核中，選取發(fā)育良好的受精卵移植到假孕母鼠的輸卵管壺腹部，待其產(chǎn)仔；PCR鑒定GAL轉(zhuǎn)基因小鼠的基因表型，Western blotting和實時定量RT-PCR檢測GAL蛋白的表達水平。 將PCR檢測陽性的F0代小鼠與野生型小鼠交配以傳代，即可獲得Fl代小鼠，同樣用PCR方法篩選出F1代陽性鼠；再用F1代陽性與陽性鼠交配，獲得F2代，以此類推，直到獲得GAL過表達轉(zhuǎn)基因純合子小鼠。 在小鼠出生后3周，5周，7周，9周分別測量所有小鼠的體重，體長和腹圍。 眼眶采血處死小鼠，留取血清、腦組織和肝組織標本；ELISA法檢測小鼠血清中GAL，胰島素水平，用臨床診斷試劑盒測定肝組織甘油三脂和總膽固醇含量。 對肝組織用甲醛固定，，切片，進行HE染色，在光鏡下觀察其病理變化。 結(jié)果: 通過原核顯微注射的方法將2968kb的轉(zhuǎn)基因片段PDGF β-GAL轉(zhuǎn)入小鼠受精卵，獲得子代小鼠50只，經(jīng)PCR檢測，有8只小鼠在基因組上整合有GAL基因(編號分別為5，28，37，43，44，45和46)，整合率為16％。 轉(zhuǎn)入的基因片段PDGF β-GAL在腦組織中的表達水平比肝組織高。 GAL過表達轉(zhuǎn)基因鼠肝組織甘油三酯和總膽固醇含量均明顯高于野生型小鼠（P0.01）；而血清胰島素水平比野生型小鼠低(P0.01)。 HE染色顯示GAL過表達轉(zhuǎn)基因鼠的肝細胞發(fā)生了不同程度的脂肪變性。 結(jié)論: 通過顯微注射法使外源基因PDGFβ-GAL在小鼠基因組中整合，成功建立了GAL過表達轉(zhuǎn)基因小鼠，為進一步研究GAL在神經(jīng)系統(tǒng)的生物學功能奠定了重要基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：甘丙肽 過表達 小鼠 轉(zhuǎn)基因
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;Q78
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 插圖、附表清單10-11
• 主要符號中英文對照表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-29
• 1.材料14-19
• 1.2 菌液和質(zhì)粒14
• 1.3 主要試劑14-15
• 1.4 主要儀器15-16
• 1.5 主要試劑配制16-19
• 2.實驗方法19-29
• 2.1 目的片段 PDGF-GAL 的制備19-20
• 2.2 GAL 轉(zhuǎn)基因鼠的制備20-22
• 2.3 GAL 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定22-28
• 2.4 轉(zhuǎn)基因小鼠的繁殖28
• 2.5 血糖和胰島素水平的測定28
• 2.6 肝組織甘油三酯和總膽固醇的測定28-29
• 2.7 統(tǒng)計分析29
• 結(jié)果29-37
• 1. 質(zhì)粒 PUC18-PDGFβ-Gal 的雙酶切鑒定29
• 2. 轉(zhuǎn)基因首建鼠的獲得29-30
• 3. 轉(zhuǎn)基因首建鼠的 PCR 鑒定30
• 4.轉(zhuǎn)基因小鼠 GAL 蛋白表達水平的鑒定30-31
• 5.轉(zhuǎn)基因小鼠中 GAL mRNA 相對含量測定31-33
• 6.轉(zhuǎn)基因小鼠的繁殖33-34
• 7.轉(zhuǎn)基因小鼠的生長情況34-35
• 8.血糖值和血清胰島素水平35
• 9.肝組織甘油三酯和總膽固醇含量35-36
• 10.肝組織的病理切片36-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-50
• 參考文獻47-50
• 個人簡歷50-51
• 致謝51

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本文編號：384964