本文關鍵詞：人呼吸道合胞病毒適應性傳代的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)是造成嬰幼兒肺炎和細支氣管炎的主要病原體,同時也是造成免疫力低下的病人及老人發(fā)病和死亡的重要原因。因此,有必要開發(fā)出一種疫苗來預防RSV,但至今還沒有安全有效的疫苗問世。RSV冷適應減毒疫苗具有獨特的優(yōu)勢而成為最有潛力的候選疫苗。本研究將篩選到的RSV毒株在Vero細胞上進行冷適應,在A549細胞上評價適應株的冷適應性和溫度敏感性,并通過動物實驗評價適應株的減毒特性和免疫原性。本實驗的研究工作包括兩個部分：(1)RSV病毒冷適應；(2)RSV適應株生物學特性評價,包括冷適應性、溫度敏感性、減毒特性和免疫原性的評價。(1)RSV毒株的冷適應本實驗從155份兒童的痰樣中篩選到14份RSV病毒株,這些毒株和RSV Long株在Vero細胞上37℃?zhèn)鞔?次、32℃?zhèn)鞔?0次、28℃?zhèn)鞔?5次、25℃?zhèn)鞔?0次,淘汰在傳代過程中不能引起細胞病變的毒株,在25℃冷適應結束時,只有KM300、KM501、KM516、 KM518、RSV Long株還能引起細胞病變,通過測序和比對,確定都是RSV病毒。(2)RSV適應株生物學特性評價RSV毒株在25℃冷適應結束時,用A549細胞測定適應株在25℃、32℃和39℃時的感染滴度,評價適應株的冷適應性和溫度敏感性,可以看出KM300、KM501、KM516、KM518、 RSV Long株只有溫度敏感性沒有冷適應性。將RSV適應株和野毒株接種小鼠,4天后取肺臟做病理切片,可以看出RSV適應株KM300、KM501、KM516有一定的減毒效果。隨后測定上下呼吸道殘余病毒滴度,結果表明在體內(nèi)RSV適應株病毒復制能力比野毒株低。接種兩周后取外周血的血清,測定血清中總抗體和中和抗體,以及肺部灌洗液的總抗體和中和抗體,評價RSV適應株的免疫原性。小鼠接種后的血清總抗體效價在1：50～1：300,血清中和抗體效價為1：2.82～1：5.62,肺部灌洗液總抗體滴度為1：4～1：8,肺部灌洗液中和抗體為1：2～1：3.98,適應株的抗體滴度與野毒株相當,說明適應株有良好的免疫原性。本論文將RSV毒株進行了冷適應,對RSV適應株的冷適應性、溫度敏感性、減毒特性、免疫原性進行了評價,為更好更深入地研究RSV冷適應疫苗奠定了基礎。
【關鍵詞】：呼吸道合胞病毒 冷適應 溫度敏感性 減毒 免疫原性
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.14
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 縮略語索引12-13
• 第一章 前言13-22
• 1.1 呼吸道合胞病毒基本特征13-14
• 1.2 呼吸道合胞病毒疫苗研究進展以及存在的問題14-21
• 1.2.1 呼吸道合胞病毒疫苗研制面臨的困難14-15
• 1.2.2 呼吸道合胞病毒疫苗研制歷程15-18
• 1.2.3 減毒活疫苗優(yōu)勢和研制情況18-21
• 1.3 本論文研究的理論依據(jù)、目的和意義21-22
• 1.3.1 本論文研究的理論依據(jù)21
• 1.3.2 本論文研究的背景、目的和意義21-22
• 第二章 RSV毒株冷適應與鑒定22-40
• 2.1 材料和方法22-29
• 2.1.1 材料22
• 2.1.2 主要試劑及藥品22-23
• 2.1.3 溶液配制23-25
• 2.1.4 主要儀器25-26
• 2.1.5 方法26-29
• 2.2 結果29-37
• 2.2.1 毒株的初步篩選和增殖29-31
• 2.2.2 毒株的初步鑒定與測序31-33
• 2.2.3 冷適應過程中RSV毒株生長情況33-34
• 2.2.4 RSV適應株挑單斑純化34
• 2.2.5 RSV適應株鑒定34-37
• 2.3 討論37-38
• 2.3.1 毒株的增殖、鑒定37
• 2.3.2 RSV冷適應傳代37-38
• 2.3.3 RSV毒株冷適應過程中的鑒定38
• 2.4 本章小結38-40
• 第三章 RSV適應株生物學特性測定40-67
• 3.1 材料和方法40-49
• 3.1.1 實驗動物、細胞和毒株40
• 3.1.2 主要試劑和儀器40
• 3.1.3 主要溶液配制40-41
• 3.1.4 方法41-49
• 3.2 結果49-61
• 3.2.1 RSV在A549細胞和Vero細胞上的病毒滴度49-50
• 3.2.2 RSV毒株的感染滴度以及適應株的冷適應性和溫度敏感性50-51
• 3.2.3 接種后小鼠體重變化和臟器系數(shù)51-53
• 3.2.4 小鼠病理切片觀察53-56
• 3.2.5 小鼠上下呼吸道殘余病毒滴度56-58
• 3.2.6 小鼠IL-4和IFN-γ測定58-59
• 3.2.7 病毒蛋白和細胞蛋白含量測定59
• 3.2.8 RSV適應株免疫原性測定59-60
• 3.2.9 RSV毒株的生物學特性總結60-61
• 3.3 討論61-66
• 3.3.1 A549細胞和Vero細胞的選用61
• 3.3.2 RSV適應株的生物學特性61-63
• 3.3.3 動物模型和接種方式的選擇63
• 3.3.4 RSV適應株的減毒特性63-64
• 3.3.5 RSV適應株在體內(nèi)復制64-65
• 3.3.6 小鼠IL-4和IFN-γ測定65
• 3.3.7 小鼠免疫原性測定65-66
• 3.4 本章小結66-67
• 第四章 全文總結67-68
• 第五章 展望68-69
• 致謝69-70
• 參考文獻70-74
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文及參與項目目錄74

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1 張靜yN;周曾芬;李曉燕;蔣海燕;張磊;賈友蘭;;培養(yǎng)幽門螺桿菌-小鼠適應株的實驗研究[J];河北醫(yī)藥;2006年01期

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本文編號：383326