本文關(guān)鍵詞：嘌呤能受體P2Y6在抗病毒免疫中的功能和機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胞外核苷酸作為“危險(xiǎn)信號(hào)”在免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。細(xì)胞在炎癥、損傷、死亡等情況下會(huì)釋放核苷酸,通過(guò)與細(xì)胞膜上的核苷酸受體P2家族結(jié)合,從而引起細(xì)胞一系列生理功能的改變。P2受體家族有兩個(gè)亞型：P2X受體和P2Y受體。P2Y6是P2Y家族的重要成員,已發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。我們之前的研究表明,UDP及其受體P2Y6能夠通過(guò)招募單核巨噬細(xì)胞提高宿主抗細(xì)菌感染的能力。但是,P2Y6在抗病毒功能方面的研究還未有報(bào)道。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)UDP/P2Y6對(duì)水泡性口炎病毒VSV誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)具有正調(diào)控作用。首先,VSV感染可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞中P2Y6表達(dá)的上調(diào)及其特異性配體UDP釋放的增多。同時(shí),UDP能夠降低VSV病毒和GFP-慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染率,這種效應(yīng)能夠被P2Y6特異性拮抗劑MRS2678抑制。在L929細(xì)胞中穩(wěn)定干擾P2Y6后,VSV誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和病毒復(fù)制明顯增加。進(jìn)一步的機(jī)理研究表明,UDP/P2Y6的抗病毒感染功能是通過(guò)P38-JNK/ATF2-cJUN信號(hào)通路促進(jìn)IFN-β的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的,且VSV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可以促進(jìn)UDP通過(guò)自分泌或旁分泌的方式激活免疫細(xì)胞上的P2Y6受體�？傊�,我們的研究證明了UDP及其受體P2Y6在抗病毒免疫中的重要作用。這一研究結(jié)果意味著UDP/P2Y6可能作為病毒性疾病預(yù)防和治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：UDP P2Y_6 VSV IFN-β 危險(xiǎn)信號(hào)
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第一章 引言10-17
• 一. 病毒感染疾病及其危害性10-11
• 二. 模式識(shí)別與Ⅰ型干擾素的誘導(dǎo)11-13
• 三. 胞外核苷酸與危險(xiǎn)信號(hào)13-15
• 四. 胞外核苷酸受體家族15-16
• 五. 本研究的目的、內(nèi)容及意義16-17
• 第二章 材料與方法17-40
• 一. 主要研究?jī)?nèi)容17-19
• 1. 研究流程和技術(shù)路線示意圖17-18
• 2. 研究工作內(nèi)容18-19
• 二. 實(shí)驗(yàn)材料19-22
• 1. 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞19
• 2. 主要試劑與試劑盒19-20
• 3. 主要實(shí)驗(yàn)儀器20
• 4. 主要溶液配制20-22
• 三. 實(shí)驗(yàn)方法22-40
• 1. 熒光定量PCR和RT-PCR22-25
• 2. 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTS)25-26
• 3. 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blotting)26-27
• 4. 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)(Luciferase assay)27-29
• 5. 載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)(Vector construct)29-31
• 6. 定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)31
• 7. 慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實(shí)驗(yàn)31-33
• 8. 干擾素介導(dǎo)的抗病毒活性測(cè)量實(shí)驗(yàn)(結(jié)晶紫染色法)33-34
• 9. 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)34
• 10. GFP-慢病毒包裝及感染實(shí)驗(yàn)34-36
• 11. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡技術(shù)(Annexin V/PI雙染色法)36
• 12. 熒光偏振實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UDP釋放(Transcreener UDP~2 FP Assay)實(shí)驗(yàn)36-37
• 13. VSV病毒擴(kuò)增及滴度測(cè)定實(shí)驗(yàn)37-40
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-64
• 一. VSV感染與UDP釋放及P2Y_6表達(dá)之間的關(guān)系40-43
• 1.1 VSV感染上調(diào)P2Y_6的表達(dá)40-41
• 1.2 VSV感染促進(jìn)細(xì)胞釋放UDP41-42
• 1.3 討論與小結(jié)42-43
• 二. UDP/P2Y_6提高細(xì)胞抗病毒感染能力43-50
• 2.1 P2Y_6特異性性激動(dòng)劑UDP和抑制劑MRS2578對(duì)細(xì)胞的增殖無(wú)顯著影響43-45
• 2.2 P2Y_6提高細(xì)胞抗VSV病毒及GFP-慢病毒感染的能力45-46
• 2.3 穩(wěn)定干擾P2Y_6后L929細(xì)胞抗VSV感染能力降低46-49
• 2.4 討論與小結(jié)49-50
• 三. P2Y6激動(dòng)劑UDP促進(jìn)細(xì)胞分泌干擾素β50-53
• 3.1 UDP直接作用可上調(diào)RAW264.7中IFN-β的mRNA表達(dá)水平50
• 3.2 UDP可協(xié)同VSV提高IFN-β的產(chǎn)生50-52
• 3.3 討論與小結(jié)52-53
• 四. UDP/P2Y_6通過(guò)IFN-β提高細(xì)胞抗病毒感染的分子機(jī)制53-58
• 4.1 UDP可激活A(yù)P-1(ATF-2/c-JUN)相關(guān)信號(hào)通路53-55
• 4.2 UDP上調(diào)IFN-β的表達(dá)依賴于MAPKs/AP-1信號(hào)通路55-57
• 4.3 討論與小結(jié)57-58
• 五. VSV感染后細(xì)胞通過(guò)Pannexin和Connexin通道釋放UDP58-61
• 5.1 VSV感染引起的UDP釋放能夠被CBX和FFA抑制58-59
• 5.2 VSV感染引起凋亡蛋白Caspas-3的激活59-60
• 5.3 討論與小結(jié)60-61
• 六. 研究小結(jié)與展望61-64
• 第四章 綜述64-71
• 一. 病毒感染與模式受體64-65
• 二. Ⅰ型干擾素的誘導(dǎo)及其抗病毒機(jī)制65-66
• 三. 胞外核苷酸及其受體66-71
• 3.1 對(duì)核苷酸生理功能的認(rèn)識(shí)過(guò)程66-67
• 3.2 核苷酸釋放機(jī)制67-68
• 3.3 胞外核苷酸代謝68
• 3.4 胞外核苷酸受體68-69
• 3.5 胞外核苷酸的免疫調(diào)控功能69-71
• 第五章 參考文獻(xiàn)71-75
• 附錄Ⅰ 縮略詞75-77
• 附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間科研工作成果77-79
• 致謝79

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