發(fā)布時間：2017-05-21 09:10

  本文關鍵詞：嘌呤能受體P2Y6在抗病毒免疫中的功能和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胞外核苷酸作為“危險信號”在免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。細胞在炎癥、損傷、死亡等情況下會釋放核苷酸,通過與細胞膜上的核苷酸受體P2家族結合,從而引起細胞一系列生理功能的改變。P2受體家族有兩個亞型：P2X受體和P2Y受體。P2Y6是P2Y家族的重要成員,已發(fā)現(xiàn)其對多種細胞因子的產(chǎn)生發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。我們之前的研究表明,UDP及其受體P2Y6能夠通過招募單核巨噬細胞提高宿主抗細菌感染的能力。但是,P2Y6在抗病毒功能方面的研究還未有報道。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)UDP/P2Y6對水泡性口炎病毒VSV誘導的免疫反應具有正調(diào)控作用。首先,VSV感染可促進RAW264.7細胞中P2Y6表達的上調(diào)及其特異性配體UDP釋放的增多。同時,UDP能夠降低VSV病毒和GFP-慢病毒對細胞的感染率,這種效應能夠被P2Y6特異性拮抗劑MRS2678抑制。在L929細胞中穩(wěn)定干擾P2Y6后,VSV誘導的細胞死亡和病毒復制明顯增加。進一步的機理研究表明,UDP/P2Y6的抗病毒感染功能是通過P38-JNK/ATF2-cJUN信號通路促進IFN-β的表達而實現(xiàn)的,且VSV誘導的細胞凋亡可以促進UDP通過自分泌或旁分泌的方式激活免疫細胞上的P2Y6受體。總之,我們的研究證明了UDP及其受體P2Y6在抗病毒免疫中的重要作用。這一研究結果意味著UDP/P2Y6可能作為病毒性疾病預防和治療的一個重要靶點。
【關鍵詞】：UDP P2Y_6 VSV IFN-β 危險信號
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第一章 引言10-17
• 一. 病毒感染疾病及其危害性10-11
• 二. 模式識別與Ⅰ型干擾素的誘導11-13
• 三. 胞外核苷酸與危險信號13-15
• 四. 胞外核苷酸受體家族15-16
• 五. 本研究的目的、內(nèi)容及意義16-17
• 第二章 材料與方法17-40
• 一. 主要研究內(nèi)容17-19
• 1. 研究流程和技術路線示意圖17-18
• 2. 研究工作內(nèi)容18-19
• 二. 實驗材料19-22
• 1. 實驗細胞19
• 2. 主要試劑與試劑盒19-20
• 3. 主要實驗儀器20
• 4. 主要溶液配制20-22
• 三. 實驗方法22-40
• 1. 熒光定量PCR和RT-PCR22-25
• 2. 細胞增殖實驗(MTS)25-26
• 3. 免疫印跡實驗(Western Blotting)26-27
• 4. 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與熒光素酶報告基因?qū)嶒?Luciferase assay)27-29
• 5. 載體構建實驗(Vector construct)29-31
• 6. 定點突變實驗31
• 7. 慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗31-33
• 8. 干擾素介導的抗病毒活性測量實驗(結晶紫染色法)33-34
• 9. 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)34
• 10. GFP-慢病毒包裝及感染實驗34-36
• 11. 流式細胞儀檢測細胞凋亡技術(Annexin V/PI雙染色法)36
• 12. 熒光偏振實驗檢測UDP釋放(Transcreener UDP~2 FP Assay)實驗36-37
• 13. VSV病毒擴增及滴度測定實驗37-40
• 第三章 實驗結果40-64
• 一. VSV感染與UDP釋放及P2Y_6表達之間的關系40-43
• 1.1 VSV感染上調(diào)P2Y_6的表達40-41
• 1.2 VSV感染促進細胞釋放UDP41-42
• 1.3 討論與小結42-43
• 二. UDP/P2Y_6提高細胞抗病毒感染能力43-50
• 2.1 P2Y_6特異性性激動劑UDP和抑制劑MRS2578對細胞的增殖無顯著影響43-45
• 2.2 P2Y_6提高細胞抗VSV病毒及GFP-慢病毒感染的能力45-46
• 2.3 穩(wěn)定干擾P2Y_6后L929細胞抗VSV感染能力降低46-49
• 2.4 討論與小結49-50
• 三. P2Y6激動劑UDP促進細胞分泌干擾素β50-53
• 3.1 UDP直接作用可上調(diào)RAW264.7中IFN-β的mRNA表達水平50
• 3.2 UDP可協(xié)同VSV提高IFN-β的產(chǎn)生50-52
• 3.3 討論與小結52-53
• 四. UDP/P2Y_6通過IFN-β提高細胞抗病毒感染的分子機制53-58
• 4.1 UDP可激活AP-1(ATF-2/c-JUN)相關信號通路53-55
• 4.2 UDP上調(diào)IFN-β的表達依賴于MAPKs/AP-1信號通路55-57
• 4.3 討論與小結57-58
• 五. VSV感染后細胞通過Pannexin和Connexin通道釋放UDP58-61
• 5.1 VSV感染引起的UDP釋放能夠被CBX和FFA抑制58-59
• 5.2 VSV感染引起凋亡蛋白Caspas-3的激活59-60
• 5.3 討論與小結60-61
• 六. 研究小結與展望61-64
• 第四章 綜述64-71
• 一. 病毒感染與模式受體64-65
• 二. Ⅰ型干擾素的誘導及其抗病毒機制65-66
• 三. 胞外核苷酸及其受體66-71
• 3.1 對核苷酸生理功能的認識過程66-67
• 3.2 核苷酸釋放機制67-68
• 3.3 胞外核苷酸代謝68
• 3.4 胞外核苷酸受體68-69
• 3.5 胞外核苷酸的免疫調(diào)控功能69-71
• 第五章 參考文獻71-75
• 附錄Ⅰ 縮略詞75-77
• 附錄Ⅱ 攻讀碩士學位期間科研工作成果77-79
• 致謝79

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;機體抗病毒免疫觸發(fā)機制研究獲新發(fā)現(xiàn)[J];廣西科學院學報;2006年02期

2 毛飛;唐旭東;;果蠅抗病毒免疫[J];江蘇醫(yī)藥;2011年23期

3 ;抗病毒免疫[J];人民軍醫(yī);1978年12期

4 余傳霖;;抗病毒免疫[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1997年06期

5 嚴偉明;;非溶細胞性抗病毒作用機制的研究進展[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);2003年01期

6 朱巖;從治療“非典”看抗病毒免疫藥物的基礎和應用現(xiàn)狀[J];首都醫(yī)藥;2003年10期

7 ;我國在抗病毒免疫和炎癥研究領域取得新進展[J];中國西部科技;2008年11期

8 王平忠;于海濤;蔣偉;白雪帆;;自然殺傷細胞受體介導抗病毒免疫的分子機制[J];細胞與分子免疫學雜志;2013年04期

9 季曉輝;;細胞因子在抗病毒免疫中作用的研究進展[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1995年01期

10 李媛;趙西平;;自然殺傷細胞活性與機體抗病毒免疫的研究進展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年14期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 溫潔霞;仲飛;李秀錦;能昌愛;張考;陳慧慧;;白細胞介素7的生物學特性及其在抗病毒免疫中的研究進展[A];全國動物生理生化第十二次學術交流會論文摘要匯編[C];2012年

2 楊守京;李靜;高娟;孫玉靜;余璐;趙君;;漢坦病毒感染誘導熱休克反應及其增強特異性抗病毒免疫的研究[A];中華醫(yī)學會病理學分會2007年學術年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

3 倪建強;王夢溪;黃有國;;RGS2的棕櫚酰化及其功能的研究[A];第一屆全國腦與認知科學學術研討會論文集[C];2005年

4 楊鑫;陳福旺;曹宇航;逄大欣;歐陽紅生;任林柱;;熱休克蛋白在抗病毒免疫中作用的研究進展[A];全國動物生理生化第十二次學術交流會論文摘要匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 通訊員 肖鑫邋記者 曹繼軍;我抗病毒免疫和炎癥研究取得新進展[N];光明日報;2008年

2 通訊員 顏文;病毒性肝炎治療出現(xiàn)新途徑[N];醫(yī)藥導報;2007年

3 中國科學院上海巴斯德研究所外方所長 艾德銘;世界級專家為什么首選中國[N];光明日報;2014年

4 ;機體抗病毒免疫觸發(fā)機制研究獲新發(fā)現(xiàn)[N];光明日報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳思源;維生素A營養(yǎng)對兒童抗手足口病免疫力的影響[D];復旦大學;2013年

2 劉龍丁;IFN-α刺激相關細胞蛋白TIIMPSC和S24v2的功能分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 申廣輝;Ⅰ型單純皰疹病毒皮層蛋白UL41逃逸viperin抗病毒作用的分子機制[D];蘇州大學;2015年

2 劉碧霞;慢性乙肝患者抗病毒治療與停藥復發(fā)后體內(nèi)HBV特異性T細胞的研究[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

3 李瑞梅;嘌呤能受體P2Y6在抗病毒免疫中的功能和機制研究[D];華東師范大學;2013年

4 楊曉梅;呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化TLR7介導的抗病毒作用研究[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

5 史曉佾;呼吸道合胞病毒感染巨噬細胞活化Toll樣受體3、Toll樣受體7介導的抗病毒作用研究[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

6 劉宏艷;重組vMIP-Ⅱ?qū)IV/HIV特異性CD8～+T細胞抗病毒免疫功能影響的研究[D];暨南大學;2005年

7 陳敏;EV71感染患兒TLR7基因多態(tài)性及抗病毒免疫研究[D];遵義醫(yī)學院;2014年

  本文關鍵詞：嘌呤能受體P2Y6在抗病毒免疫中的功能和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：383213